تنقية الببتيد

للحصول على الببتيدات مع تسلسلات محددة من الأحماض الأمينية، نستخدم طريقة Fmoc-SPPS (تخليق الببتيد في الطور الصلب).

خلفيّة:

الببتيدات هي مواد نشطة بيولوجيا تتعلق بالوظائف الخلوية المختلفة في الكائنات الحية. يقع تركيبها الجزيئي بين الأحماض الأمينية والبروتينات، ويتكون من أحماض أمينية متعددة مرتبة بترتيب معين وترتبط بروابط الببتيد (—NH—CO—). تسمى المركبات التي تتكون من تكثيف الجفاف لجزيئين من الأحماض الأمينية ثنائيات الببتيدات، وبالمثل، هناك ثلاثي الببتيدات، ورباعي الببتيدات، وخماسي الببتيدات، وما إلى ذلك، حتى غير الببتيدات. تسمى المركبات المصنوعة عادة من 10 إلى 100 جزيء من الأحماض الأمينية من خلال تكثيف الجفاف بالبولي ببتيدات.

تشير الخدمات المخصصة للببتيد إلى تركيب الببتيدات بناءً على متطلبات العملاء، مثل التسلسل والنقاء والوزن الجزيئي ومحتوى الملح، لتلبية الاحتياجات المحددة. يتم تأكيد الوزن الجزيئي عن طريق قياس الطيف الكتلي للتأكد من صحة MS الخام، تليها تنقية باستخدام نظام اللوني السائل عالي الأداء، ثم التركيز، والتجفيد للحصول على مسحوق الببتيد الناعم.

للحصول على الببتيدات مع تسلسلات محددة من الأحماض الأمينية، نستخدم طريقة Fmoc-SPPS (تخليق الببتيد في الطور الصلب). أثناء تخليق الطور الصلب، يتم إدخال مجموعة قادرة على التفاعل مع المجموعات الكربوكسيلية على حامل الطور الصلب للتفاعل مع الأمينو المحمي، مما يثبت أول حمض أميني في الراتينج. يتم بعد ذلك إكمال التفاعل من الطرف C إلى الطرف N لإكمال تركيب تسلسل الببتيد المستهدف.

طرق التنقية:

تستخدم شركتنا نظام كروماتوغرافيا سائلة عالي الأداء مع عمود تحضير عكسي C18 للفصل والتنقية، وذلك باتباع الخطوات التالية:

تحديد الهوية:خذ كمية صغيرة من الببتيد الخام لقياس الطيف الكتلي للتأكد من وجود الببتيد المستهدف (إذا كانت الإجابة بنعم، تأكد من وقت الاحتفاظ به في العمود C18 من خلال التحليل اللوني؛ إذا لم يكن الأمر كذلك، قم بإعادة تركيب الببتيد الخام).

تحلل:استخدم المساعدة بالموجات فوق الصوتية للحل، وعادةً ما يتم اختيار 90% ماء + 10% أسيتونتريل (ميثانول أو أيزوبروبانول). بالنسبة لصعوبة الذوبان، أضف حمض الأسيتيك المناسب أو حمض ثلاثي فلورو أسيتيك للمساعدة في الذوبان إذا كان التسلسل يحتوي على نسبة أعلى من الأحماض الأمينية الأساسية؛ أضف ماء الأمونيا المناسب إذا كانت الأحماض الأمينية الحمضية هي السائدة. استخدم DMSO (ثنائي ميثيل سلفوكسيد) إذا كانت الأحماض الأمينية الكارهة للماء هي السائدة.

الترشيح:قم بتصفية المنتج الخام المذاب من خلال غشاء مرشح 0.45 ميكرومتر (لحماية العمود التحضيري) لاستخدامه لاحقًا.

تحميل العينة:استخدم النظام التحضيري السائل عالي الأداء لإدخال عينة السائل في العمود التحضيري.

شطف:استناداً إلى تدرج الشطف المحدد في الخطوة 1)، قم بفصل الشوائب عن الببتيدات باستخدام اختلافات قطبية الببتيدات ذات الطول المتفاوت.

مزايا استخدام نظام كروماتوغرافيا سائلة عالي الأداء:

دقة أعلى من طرق التحليل اللوني الأخرى؛ يتمتع العمود التحضيري C18 المستخدم بكفاءة عمود عالية، وعمر خدمة طويل، وقابلية استنساخ جيدة، مما يسمح بالاستخدام المتكرر؛ السرعة والكفاءة العالية، حيث تتم تنقية كل عينة خلال دقائق أو عشرات الدقائق؛ تطبيق واسع وتقنية ناضجة للكروماتوغرافيا العكسية الطور، مما يوفر انتقائية جيدة لأنواع مختلفة من المركبات العضوية.

تنقية الببتيد الخام والتجفيد:

يتم فصل الببتيد الخام وتنقيته باستخدام نظام تحضير كروماتوجرافيا سائل عالي الأداء وتحليله للنقاء باستخدام كروماتوجرافيا سائل عالي الأداء (HPLC) للحصول على المكونات السائلة المؤهلة.

نظام التبخر الدوار: يتم إخضاع المكون السائل المؤهل للتسخين الفراغي لإزالة المذيبات العضوية المتطايرة بسهولة، وفي النهاية يتم الحصول على محلول يحتوي على الببتيد المستهدف، والذي يتم بعد ذلك وضعه في الثلاجة لتكوين بلورات ثلج صلبة.

نظام التجفيف بالتجميد: يتم وضع الحاويات التي تحتوي على بلورات الثلج الصلبة على صينية المجفف بالتجميد أو منفذ التفريغ. في بيئة مفرغة، يتم تسامي منتج الببتيد، مما يؤدي في النهاية إلى إنتاج مسحوق الببتيد الصلب.

بلورات الببتيد جاهزة للتجفيف بالتجميد في مجفف التجميد.