Ачыстка пептыдаў Беларусь

Для атрымання пептыдаў са спецыфічнымі амінакіслотнымі паслядоўнасцямі мы выкарыстоўваем метад Fmoc-SPPS (цвёрдафазны пептыдны сінтэз).

Даведачная інфармацыя:

Пептыды - гэта біялагічна актыўныя рэчывы, звязаныя з рознымі функцыямі клетак біялагічных арганізмаў. Іх малекулярная структура знаходзіцца паміж амінакіслотамі і вавёркамі і складаецца з некалькіх амінакіслот, размешчаных у пэўным парадку і звязаных пептыднымі сувязямі (—NH—CO—). Злучэнні, якія ўтвараюцца пры дэгідратаціі кандэнсацыі дзвюх малекул амінакіслот, называюцца дыпептыдамі, гэтак жа існуюць трыпептыды, тэтрапептыды, пентапептыды і гэтак далей, аж да нонапептыдаў. Злучэнні, якія звычайна складаюцца з 10-100 малекул амінакіслот шляхам дэгідратацыі, называюцца поліпептыдамі.

Індывідуальныя паслугі пептыдаў адносяцца да сінтэзу пептыдаў на аснове патрабаванняў заказчыка, такіх як паслядоўнасць, чысціня, малекулярная маса і ўтрыманне солі, для задавальнення канкрэтных патрэб. Малекулярная маса пацвярджаецца з дапамогай мас-спектраметрыі, каб пераканацца ў правільнасці неачышчанага МС, з наступнай ачысткай з выкарыстаннем сістэмы высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі, затым канцэнтрацыяй і ліафілізацыяй для атрымання дробнага пептыднага парашка.

Для атрымання пептыдаў са спецыфічнымі амінакіслотнымі паслядоўнасцямі мы выкарыстоўваем метад Fmoc-SPPS (цвёрдафазны пептыдны сінтэз). Падчас цвёрдафазнага сінтэзу група, здольная ўступаць у рэакцыю з карбаксільнымі групамі, уводзіцца на цвёрдафазны носьбіт, каб уступіць у рэакцыю з амінакіслатой, абароненай амінакіслатой, замацоўваючы першую амінакіслату на смале. Затым рэакцыя завяршаецца ад C-канца да N-канца, каб завяршыць сінтэз мэтавай пептыднай паслядоўнасці.

Метады ачысткі:

Наша кампанія выкарыстоўвае сістэму высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі са зваротнай падрыхтоўчай калонкай C18 для падзелу і ачысткі, выконваючы наступныя этапы:

Ідэнтыфікацыя:Вазьміце невялікую колькасць сырога пептыда для мас-спектраметрыі, каб пацвердзіць наяўнасць мэтавага пептыда (калі так, пацвердзіце час яго ўтрымання ў калонцы С18 з дапамогай аналітычнай храматаграфіі; калі не, паўторна сінтэзуйце сыры пептыд).

Растварэнне:Выкарыстоўвайце ультрагукавую дапамогу для растварэння, звычайна выбіраючы 90% вады + 10% ацэтанітрылу (метанол або ізапрапанол). Для цяжкай растваральнасці дадайце адпаведную воцатную кіслату або трыфторуксусную кіслату, каб дапамагчы растварэнню, калі паслядоўнасць мае больш высокую долю асноўных амінакіслот; дадаць адпаведную аміячную ваду, калі пераважаюць кіслыя амінакіслоты. Выкарыстоўвайце ДМСО (диметилсульфоксид), калі пераважаюць гідрафобныя амінакіслоты.

фільтраванне:Адфільтраваць раствораны сыры прадукт праз мембрану фільтра 0.45 мкм (для абароны падрыхтоўчай калоны) для наступнага выкарыстання.

Загрузка ўзору:Выкарыстоўвайце высокапрадукцыйную сістэму падрыхтоўкі вадкасці для ўводу пробы вадкасці ў падрыхтоўчую калонку.

Элюцыя:На падставе градыенту элюіравання, вызначанага на этапе 1), аддзяліце прымешкі ад пептыдаў, выкарыстоўваючы адрозненні палярнасці пептыдаў рознай даўжыні.

Перавагі выкарыстання сістэмы высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі:

Больш высокае дазвол, чым іншыя метады храматаграфіі; выкарыстоўваная падрыхтоўчая калона C18 мае высокую эфектыўнасць калоны, працяглы тэрмін службы і добрую ўзнаўляльнасць, што дазваляе шматразовае выкарыстанне; высокая хуткасць і высокая эфектыўнасць, пры гэтым кожны ўзор ачышчаецца на працягу некалькіх хвілін або дзесяткаў хвілін; шырокае прымяненне і адпрацаваная тэхналогія зваротна-фазавай храматаграфіі, якая забяспечвае добрую селектыўнасць для розных тыпаў арганічных злучэнняў.

Ачыстка сырых пептыдаў і ліяфілізацыя:

Неачышчаны пептыд аддзяляюць і чысцяць з дапамогай падрыхтоўчай сістэмы высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі і аналізуюць на чысціню з дапамогай высокаэфектыўнага вадкаснага храматографа (ВЭЖХ) для атрымання кваліфікаваных вадкіх кампанентаў.

Ротарная сістэма выпарвання: кваліфікаваны вадкі кампанент падвяргаецца вакуумнаму нагрэву для выдалення лёгка лятучых арганічных растваральнікаў, у выніку атрымліваецца раствор, які змяшчае мэтавы пептыд, які затым змяшчаецца ў маразільную камеру для адукацыі цвёрдых крышталяў лёду.

Сістэма сублимационной сушкі: кантэйнеры з цвёрдымі крышталямі лёду размяшчаюцца на паддоне сублимационной сушылкі або вакуумным порту. У вакуумным асяроддзі пептыдны прадукт сублімуюць, у канчатковым выніку атрымліваючы цвёрды пептыдны парашок.

Крышталі пептыда гатовыя да сублимационной сушкі ў сублимационной сушылцы.