Пречистване на пептиди България

За да получим пептиди със специфични аминокиселинни последователности, ние използваме метода Fmoc-SPPS (твърдофазов пептиден синтез).

Предистория:

Пептидите са биоактивни вещества, свързани с различни клетъчни функции в биологичните организми. Тяхната молекулярна структура е между аминокиселини и протеини, състояща се от множество аминокиселини, подредени в определен ред и свързани с пептидни връзки (—NH—CO—). Съединенията, образувани от кондензацията на две аминокиселинни молекули, се наричат ​​дипептиди, по същия начин има трипептиди, тетрапептиди, пентапептиди и т.н., до нонапептиди. Съединения, които обикновено се образуват от 10 до 100 молекули аминокиселини чрез кондензация на дехидратация, се наричат ​​полипептиди.

Персонализираните пептидни услуги се отнасят до синтеза на пептиди въз основа на изискванията на клиента, като последователност, чистота, молекулно тегло и съдържание на сол, за да отговорят на специфични нужди. Молекулното тегло се потвърждава чрез масова спектрометрия, за да се гарантира правилността на суровия MS, последвано от пречистване с помощта на високоефективна течна хроматографска система, след това концентриране и лиофилизация за получаване на финия пептиден прах.

За да получим пептиди със специфични аминокиселинни последователности, ние използваме метода Fmoc-SPPS (твърдофазов пептиден синтез). По време на твърдофазния синтез, група, способна да реагира с карбоксилни групи, се въвежда върху твърдофазния носител, за да реагира с амино-защитения амино, закрепвайки първата аминокиселина към смолата. След това реакцията завършва от С-края до N-края, за да завърши синтеза на целевата пептидна последователност.

Методи за пречистване:

Нашата компания използва високоефективна система за течна хроматография с обратна C18 подготвителна колона за разделяне и пречистване, като следва следните стъпки:

Идентификация:Вземете малко количество суров пептид за масова спектрометрия, за да потвърдите наличието на целевия пептид (ако да, потвърдете времето му на задържане в колоната C18 чрез аналитична хроматография; ако не, повторно синтезирайте суровия пептид).

Разтваряне:Използвайте ултразвукова помощ за разтваряне, като обикновено избирате 90% вода + 10% ацетонитрил (метанол или изопропанол). За трудна разтворимост добавете подходяща оцетна киселина или трифлуорооцетна киселина, за да подпомогнете разтварянето, ако последователността има по-голям дял основни аминокиселини; добавете подходяща амонячна вода, ако преобладават киселинните аминокиселини. Използвайте DMSO (диметилсулфоксид), ако преобладават хидрофобните аминокиселини.

Филтрация:Филтрирайте разтворения суров продукт през 0.45 µm филтърна мембрана (за защита на подготвителната колона) за по-късна употреба.

Зареждане на пробата:Използвайте високоефективната система за подготовка на течности, за да въведете течната проба в подготвителната колона.

Елуиране:Въз основа на градиента на елуиране, определен в стъпка 1), отделете примесите от пептидите, като използвате разликите в полярността на пептидите с различна дължина.

Предимства от използването на високоефективна система за течна хроматография:

По-висока разделителна способност от другите хроматографски методи; използваната подготвителна колона C18 има висока ефективност на колоната, дълъг експлоатационен живот и добра възпроизводимост, което позволява многократна употреба; бърза скорост и висока ефективност, като всяка проба се пречиства в рамките на минути или десетки минути; широко приложение и развита технология на хроматография с обратна фаза, предлагаща добра селективност за различни видове органични съединения.

Пречистване и лиофилизация на суров пептид:

Суровият пептид се отделя и пречиства с помощта на препаративна система за високоефективна течна хроматография и се анализира за чистота с помощта на високоефективен течен хроматограф (HPLC), за да се получат квалифицираните течни компоненти.

Ротационна изпарителна система: Квалифицираният течен компонент се подлага на вакуумно нагряване за отстраняване на лесно летливи органични разтворители, като накрая се получава разтвор, съдържащ целевия пептид, който след това се поставя във фризер за образуване на твърди ледени кристали.

Система за сушене чрез замразяване: Контейнерите, съдържащи твърдите ледени кристали, се поставят върху таблата за сушене чрез замразяване или вакуумния порт. Във вакуумна среда пептидният продукт се сублимира, като в крайна сметка се получава твърд пептиден прах.

Пептидните кристали са готови за сушене чрез замразяване в сушилнята за замразяване.