Очистка на пептиди

За да получим пептиди с определени аминокиселинни последователности, използваме метода Fmoc-SPPS (солиднофазна синтеза на пептиди).

Фон:

Пептидите са биологично активни вещества, свързани с различни клетъчни функции в биологичните организми. Нивната молекулярна структура е между аминокиселините и белтъците, състояща се от множество аминокиселини, arrangirani в определен ред и свързани чрез пептидни връзки (—NH—CO—). Съединенията, образувани чрез дехидратационна конденсация на две аминокиселини, се наричат диептиди, аналогично имат триптиди, тетрапептиди, пентапептиди и т.н., до нонапептиди. Съединенията, обикновено формирани от 10 до 100 аминокиселини чрез дехидратационна конденсация, се наричат полипептиди.

Услугите за синтеза на пептиди според поръчка включват синтеза на пептиди според изискванията на клиента, като редица, чистота, молекулярна маса и солен състав, за да отговарят на специфични нужди. Молекулярната маса се потвърждава чрез масов спектрометър, за да се гарантира правилността на неочисания MS, след това се извършва очистване чрез система за високо производителна течна хроматография, концентриране и лиофилизация, за да се получи тонкият пептиден прах.

За получаване на пептиди с определени аминокиселинови редици използваме метода Fmoc-SPPS (синтеза на пептиди в твърда фаза). През синтезата в твърда фаза се въвежда група, способна да реагира с карбоксилни групи, на твърдия носител, който реагира с аминозащитения аминокиселин, закачайки първия аминокиселин към резина. Реакцията се извършва от C-край към N-край, за да се завърши синтезата на целевия пептиден ред.

Методи за очистване:

Нашата firma използва система за високопroduktivna течна хроматография с обратен C18 подготовителен колон за разделение и очистване, следните стъпки:

идентификация: Вземете малко количество от неочищеното пептид за масов спектър, за да потвърдите присъствието на целевия пептид (ако да, потвърдете неговото време на задържане в C18 колона чрез аналитична хроматография; ако не, повторно синтезирайте неочищеното вещество).

Дисолюция: Използвайте ултразвукова помощ за дисолюцията, обикновено избирајки 90% вода + 10% ацетонитрил (метанол или изопропанол). При трудни случаи на растворимост, добавяйте подходящо количество уксусна киселина или трифлуоруксусна киселина, за да помогнете при дисолюцията, ако последователността има по-голяма пропорция основни аминокиселини; добавяйте подходящо количество аммиачна вода, ако предоминират кисели аминокиселини. Използвайте DMSO (диметил сульфоксид), ако предоминират хидрофобни аминокиселини.

Филтриране: Филтрирайте разтворения неочищен продукт през филтърен мембранен филтър с размер 0.45 µm (за да защитите подготовителния колон) за по-късно използване.

Зареждане на проба: Използвайте високопроизводителната хроматографска система за течни вещества, за да въведете течната проба в подготовителната колона.

Елюция: На базата на елюционния градиент, определен в стъпка 1), разделете прегазите от пептидите, като използвате разликите в полярността на пептидите с различна дължина.

Преимущества при използването на високопроизводителна хроматографска система за течни вещества:

По-висока резолюция в сравнение с други методи за хроматография; C18 подготовителната колона, която се използва, има висока колонна ефективност, продължителен срок на служба и добри репродуктивни характеристики, което позволява нейното повтарящо се използване; бърза скорост и висока ефективност, като всяка проба се очистява в рамките на минути или десетки минути; широка приложимост и зрела технология на обратната фаза хроматография, която предлага добър избор за различни органични съставки.

Очистка и лиофилизация на неочиствени пептиди:

Сировият пептид се отделя и очиства чрез система за хроматографско приготвяне с висока производителност и се анализира за чистота чрез хроматограф с висока производителност (HPLC), за да се получат кvalificираните течни компоненти.

Система за ротационна еволация: Кvalificираните течни компоненти подлежат на вакуумно отопяване, за да се премахнат лесно волатилните органични растворители, като накрая се получава решение, съдържащо целевия пептид, което след това се поставя в мръзилка, за да се образуват твърди кристали от лед.

Система за мръзна сушка: Съдовете, съдържащи твърдите кристали от лед, се поставят на подовете или вакуумния порт на мръзната сушарка. В вакуумна среда пептидният продукт се сублимира, като накрая се получава твърден пептиден прах.

Пептидните кристали са готови за мръзна сушка в мръзната сушарка.