পেপটাইড পরিষ্কার

বিশেষ অ্যামিনো এসিড সিকুয়েন্স সহ পেপটাইড পাওয়ার জন্য, আমরা Fmoc-SPPS (সোলিড-ফেজ পেপটাইড সিনথেসিস) পদ্ধতি ব্যবহার করি।

পটভূমি:

পেপটাইডগুলি জীবাণুতে বিভিন্ন সেলুলার ফাংশনের সাথে সম্পর্কিত জীবনকর পদার্থ। তাদের অণু গঠন অ্যামিনো এসিড এবং প্রোটিনের মধ্যে আছে, যা বিশেষ ক্রমে বহু অ্যামিনো এসিড দ্বারা গঠিত এবং পেপটাইড বন্ধন (—NH—CO—) দ্বারা যুক্ত। দুটি অ্যামিনো এসিড অণুর জল বিযোজন সংযোজন দ্বারা গঠিত যৌগকে ডাইপেপটাইড বলা হয়, একইভাবে তিনটি অ্যামিনো এসিড থেকে ট্রাইপেপটাইড, চারটি থেকে টেট্রাপেপটাইড, পাঁচটি থেকে পেন্টাপেপটাইড এবং এভাবে নয়টি পর্যন্ত ননাপেপটাইড। ১০ থেকে ১০০টি অ্যামিনো এসিড অণুর জল বিযোজন সংযোজন দ্বারা গঠিত যৌগকে পলিপেপটাইড বলা হয়।

পেপটাইড কัส্টম সার্ভিস গ্রাহকদের প্রয়োজন অনুযায়ী পেপটাইড সংশ্লেষণ বোঝায়, যেমন ক্রম, শোধতা, মৌলিক ওজন এবং লবণ পরিমাণ, বিশেষ প্রয়োজনগুলি পূরণ করতে। মৌলিক ওজন মাস স্পেক্ট্রোমেট্রি দ্বারা নিশ্চিত করা হয় যেন ক্রুড MS সঠিক থাকে, তারপর উচ্চ-অনুদৈন্য তরল ক্রোমাটোগ্রাফি পদ্ধতি ব্যবহার করে শোধন করা হয়, তারপর আঁটা এবং লাইফোসাইজেশন করে সূক্ষ্ম পেপটাইড পাউডার পাওয়া যায়।

বিশেষ অ্যামিনো এসিড ক্রম সহ পেপটাইড পাওয়ার জন্য, আমরা Fmoc-SPPS (সোলিড-ফেজ পেপটাইড সিনথেসিস) পদ্ধতি ব্যবহার করি। সোলিড-ফেজ সংশ্লেষণের সময়, কার্বক্সিল গ্রুপের সাথে বিক্রিয়াশীল গ্রুপটি সোলিড-ফেজ বাহকের উপর প্রবেশ করে অ্যামিনো-প্রোটেক্টেড অ্যামিনোর সাথে বিক্রিয়া করে এবং প্রথম অ্যামিনো এসিডটি রেজিনে আঁকড়ে ধরে। তারপর বিক্রিয়াটি C-এন্ড থেকে N-এন্ড পর্যন্ত সম্পন্ন করে লক্ষ্য পেপটাইড ক্রম সংশ্লেষণ করে।

শোধনের পদ্ধতি:

আমাদের কোম্পানি বিচ্ছেদ এবং শোধনের জন্য উল্টো C18 প্রস্তুতকরণ কলামযুক্ত উচ্চ-পারফরম্যান্স তরল ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম ব্যবহার করে, এই ধাপগুলো অনুসরণ করে:

অভিজ্ঞতা: খাঁটি পেপটাইডের একটি ছোট পরিমাণ ম্যাস স্পেক্ট্রোমেট্রির জন্য নিন লক্ষ্য পেপটাইডের উপস্থিতি নিশ্চিত করুন (যদি হ্যাঁ, তবে বিশ্লেষণাত্মক ক্রোমাটোগ্রাফির মাধ্যমে C18 কলামে তার রিটেনশন সময় নিশ্চিত করুন; যদি না, তবে খাঁটি পেপটাইডটি পুনরায় সংশ্লেষণ করুন)।

দ্রবীভূত করা: উল্ট্রাসোনিক সহায়তার মাধ্যমে দ্রবীভূত করুন, সাধারণত ৯০% জল + ১০% অ্যাসিটনাইট্রাইল (মেথানল বা আইসোপ্রোপানল) নির্বাচন করুন। দ্রবীভাবনের জন্য কঠিন ক্ষেত্রে, যদি অনুক্রমে বেশি পরিমাণ ভিত্তিগত অ্যামিনো এসিড থাকে তবে দ্রবীভাবনে সাহায্য করতে উপযুক্ত পরিমাণ এসিটিক এসিড বা ট্রিফ্লুরোঅ্যাসিটিক এসিড যোগ করুন; যদি অ্যাসিডিক অ্যামিনো এসিড বেশি থাকে তবে উপযুক্ত পরিমাণ অ্যামোনিয়া জল যোগ করুন। যদি হাইড্রোফোবিক অ্যামিনো এসিড বেশি থাকে তবে DMSO (ডাইমেথাইল সালফক্সাইড) ব্যবহার করুন।

ফিল্টারিং: ০.৪৫ µm ফিল্টার ফিল্ম দিয়ে দ্রবীভূত কাঁটি পণ্যটি ফিল্টার করুন (প্রস্তুতকরণ কলামকে সুরক্ষিত রাখতে হবে) পরবর্তী ব্যবহারের জন্য।

নমুনা লোডিং: উচ্চ-পারফরমেন্স তরল প্রস্তুতি ব্যবস্থা ব্যবহার করে তরল নমুনা প্রস্তুতি কলামে ইনপুট করুন।

অধিলয়ন: ধাপ 1)-এ নির্ধারিত অধিলয়ন গ্রেডিয়েন্টের ভিত্তিতে, বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের পেপটাইডের পোলারিটির পার্থক্য ব্যবহার করে পেপটাইড থেকে অশোধিত উপাদানগুলি আলगা করুন।

উচ্চ-পারফরমেন্স তরল ক্রোমাটোগ্রাফি ব্যবস্থা ব্যবহারের সুবিধা:

অন্যান্য ক্রোমাটোগ্রাফি পদ্ধতির তুলনায় উচ্চ রিজোলিউশন; ব্যবহৃত C18 প্রস্তুতি কলামের উচ্চ কলাম কার্যকারিতা, দীর্ঘ ব্যবহার জীবন এবং ভাল পুনরাবৃত্তি সুবিধা রয়েছে, যা পুনরাবৃত্তি ব্যবহারের অনুমতি দেয়; দ্রুত গতি এবং উচ্চ কার্যকারিতা, প্রতি নমুনা শুদ্ধ হয় মিনিটের মধ্যে বা দশকের মধ্যে; বিপরীত দিকের ক্রোমাটোগ্রাফির ব্যাপক প্রয়োগ এবং পরিপক্ব প্রযুক্তি, যা বিভিন্ন ধরনের জৈব যৌগের জন্য ভাল নির্বাচন প্রদান করে।

কRUDE পেপটাইড শুদ্ধীকরণ এবং লাইফোজিফিকেশন:

আকার পেপটাইডটি উচ্চ-অনুদিগ্দ তরল ক্রোমাটোগ্রাফি প্রস্তুতকরণ ব্যবস্থা ব্যবহার করে আলग করা এবং শোধিত হয়, এবং এটি উচ্চ-অনুদিগ্দ তরল ক্রোমাটোগ্রাফ (HPLC) ব্যবহার করে শোধিতা বিশ্লেষণ করা হয় যাতে যোগ্য তরল উপাদান পাওয়া যায়।

রোটারি বাষ্পীকরণ ব্যবস্থা: যোগ্য তরল উপাদানটি ব্যাকুম গরম করা হয় যাতে সহজেই বাষ্পীভূত হওয়া যায় এমন জৈব দ্রাবক অপসারণ করা যায়, শেষ পর্যন্ত লক্ষ্য পেপটাইড বিশিষ্ট একটি দ্রবণ পাওয়া যায়, যা তারপরে ফ্রিজারে রাখা হয় যাতে ঠাণ্ডা বরফের ক্রিস্টাল গঠিত হয়।

ফ্রিজ-ডাইং ব্যবস্থা: বরফের ক্রিস্টাল ধারণকারী পাত্রগুলি ফ্রিজ-ডাইয়ার ট্রে বা ব্যাকুম মুখে রাখা হয়। ব্যাকুম পরিবেশে, পেপটাইড পণ্যটি উপগমন প্রক্রিয়ায় যায়, যা শেষ পর্যন্ত ঠকা পেপটাইড পাউডার উৎপাদন করে।

পেপটাইড ক্রিস্টালগুলি ফ্রিজ-ডাইয়ারে ফ্রিজ-ডাইং জন্য প্রস্তুত।