পেপটাইড পরিশোধন

নির্দিষ্ট অ্যামিনো অ্যাসিড ক্রম সহ পেপটাইডগুলি পেতে, আমরা Fmoc-SPPS (সলিড-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণ) পদ্ধতি ব্যবহার করি।

পটভূমি:

পেপটাইড হল জৈবিক জীবের বিভিন্ন সেলুলার ফাংশন সম্পর্কিত জৈব সক্রিয় পদার্থ। তাদের আণবিক গঠন অ্যামিনো অ্যাসিড এবং প্রোটিনের মধ্যে রয়েছে, একাধিক অ্যামিনো অ্যাসিড নিয়ে গঠিত একটি নির্দিষ্ট ক্রমে সাজানো এবং পেপটাইড বন্ধন (—NH-CO—) দ্বারা সংযুক্ত। দুটি অ্যামিনো অ্যাসিড অণুর ডিহাইড্রেশন ঘনীভবন দ্বারা গঠিত যৌগগুলিকে ডাইপেপটাইড বলা হয়, একইভাবে, ট্রিপেপটাইডস, টেট্রাপেপটাইডস, পেন্টাপেপ্টাইডস এবং তাই ননপেপ্টাইড পর্যন্ত রয়েছে। ডিহাইড্রেশন ঘনীভবনের মাধ্যমে সাধারণত 10 থেকে 100 অ্যামিনো অ্যাসিড অণু থেকে তৈরি যৌগগুলিকে পলিপেপটাইড বলা হয়।

পেপটাইড কাস্টম পরিষেবাগুলি গ্রাহকের প্রয়োজনীয়তাগুলির উপর ভিত্তি করে পেপটাইডগুলির সংশ্লেষণকে নির্দেশ করে, যেমন ক্রম, বিশুদ্ধতা, আণবিক ওজন এবং লবণের পরিমাণ, নির্দিষ্ট চাহিদা মেটাতে। অশোধিত MS এর সঠিকতা নিশ্চিত করার জন্য ভর স্পেকট্রোমেট্রি দ্বারা আণবিক ওজন নিশ্চিত করা হয়, তারপরে একটি উচ্চ-কার্যক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম ব্যবহার করে পরিশোধন, তারপর ঘনত্ব এবং সূক্ষ্ম পেপটাইড পাউডার পেতে লাইওফিলাইজেশন করা হয়।

নির্দিষ্ট অ্যামিনো অ্যাসিড সিকোয়েন্স সহ পেপটাইড পেতে, আমরা Fmoc-SPPS (সলিড-ফেজ পেপটাইড সংশ্লেষণ) পদ্ধতি ব্যবহার করি। সলিড-ফেজ সংশ্লেষণের সময়, কার্বক্সিলিক গ্রুপের সাথে বিক্রিয়া করতে সক্ষম একটি গোষ্ঠীকে সলিড-ফেজ ক্যারিয়ারে অ্যামিনো-সুরক্ষিত অ্যামিনোর সাথে বিক্রিয়া করার জন্য প্রবর্তন করা হয়, প্রথম অ্যামিনো অ্যাসিডকে রজনে নোঙর করে। টার্গেট পেপটাইড সিকোয়েন্স সংশ্লেষণ সম্পূর্ণ করার জন্য প্রতিক্রিয়াটি সি-এন্ড থেকে এন-এন্ড পর্যন্ত সম্পন্ন হয়।

পরিশোধন পদ্ধতি:

আমাদের কোম্পানি এই পদক্ষেপগুলি অনুসরণ করে পৃথকীকরণ এবং পরিশোধনের জন্য একটি বিপরীত C18 প্রস্তুতিমূলক কলাম সহ একটি উচ্চ-কর্মক্ষমতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম ব্যবহার করে:

সনাক্তকারী:লক্ষ্য পেপটাইডের উপস্থিতি নিশ্চিত করতে ভর স্পেকট্রোমেট্রির জন্য অল্প পরিমাণে অপরিশোধিত পেপটাইড নিন (যদি হ্যাঁ, বিশ্লেষণাত্মক ক্রোমাটোগ্রাফির মাধ্যমে C18 কলামে এর ধারণ সময় নিশ্চিত করুন; যদি না হয়, অপরিশোধিত পেপটাইড পুনরায় সংশ্লেষিত করুন)।

দ্রবীভূতকরণ:দ্রবীভূত করার জন্য অতিস্বনক সহায়তা ব্যবহার করুন, সাধারণত 90% জল + 10% অ্যাসিটোনিট্রিল (মিথানল বা আইসোপ্রোপ্যানল) নির্বাচন করে। কঠিন দ্রবণীয়তার জন্য, দ্রবীভূত করতে সাহায্য করার জন্য উপযুক্ত অ্যাসিটিক অ্যাসিড বা ট্রাইফ্লুরোএসেটিক অ্যাসিড যোগ করুন যদি ক্রমটিতে মৌলিক অ্যামিনো অ্যাসিডের অনুপাত বেশি থাকে; অ্যাসিডিক অ্যামিনো অ্যাসিড প্রাধান্য থাকলে উপযুক্ত অ্যামোনিয়া জল যোগ করুন। হাইড্রোফোবিক অ্যামিনো অ্যাসিড প্রাধান্য থাকলে DMSO (ডাইমিথাইল সালফক্সাইড) ব্যবহার করুন।

পরিস্রুতি:পরে ব্যবহারের জন্য 0.45 µm ফিল্টার ঝিল্লি (প্রস্তুতিমূলক কলাম রক্ষা করার জন্য) মাধ্যমে দ্রবীভূত অপরিশোধিত পণ্যটি ফিল্টার করুন।

নমুনা লোড হচ্ছে:প্রস্তুতিমূলক কলামে তরল নমুনা ইনপুট করতে উচ্চ-কার্যক্ষমতা সম্পন্ন তরল প্রস্তুতিমূলক সিস্টেম ব্যবহার করুন।

ইলুশন:ধাপ 1 এ নির্ধারিত ইলুশন গ্রেডিয়েন্টের উপর ভিত্তি করে), বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের পেপটাইডের পোলারিটি পার্থক্য ব্যবহার করে পেপটাইড থেকে অমেধ্য আলাদা করুন।

একটি উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম ব্যবহার করার সুবিধা:

অন্যান্য ক্রোমাটোগ্রাফি পদ্ধতির তুলনায় উচ্চ রেজোলিউশন; ব্যবহৃত C18 প্রস্তুতিমূলক কলামে উচ্চ কলাম দক্ষতা, দীর্ঘ সেবা জীবন এবং ভাল প্রজননযোগ্যতা রয়েছে, যা বারবার ব্যবহারের অনুমতি দেয়; দ্রুত গতি এবং উচ্চ দক্ষতা, প্রতিটি নমুনা কয়েক মিনিট বা কয়েক মিনিটের মধ্যে শুদ্ধ করা হয়; রিভার্স-ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফির বিস্তৃত প্রয়োগ এবং পরিপক্ক প্রযুক্তি, বিভিন্ন ধরণের জৈব যৌগের জন্য ভাল নির্বাচনযোগ্যতা প্রদান করে।

অপরিশোধিত পেপটাইড পরিশোধন এবং লাইওফিলাইজেশন:

অপরিশোধিত পেপটাইড একটি উচ্চ-পারফরম্যান্স তরল ক্রোমাটোগ্রাফি প্রিপারেটরি সিস্টেম ব্যবহার করে আলাদা এবং বিশুদ্ধ করা হয় এবং যোগ্য তরল উপাদানগুলি পেতে একটি উচ্চ-পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফ (HPLC) ব্যবহার করে বিশুদ্ধতার জন্য বিশ্লেষণ করা হয়।

ঘূর্ণনশীল বাষ্পীভবন সিস্টেম: যোগ্য তরল উপাদানটি সহজে উদ্বায়ী জৈব দ্রাবক অপসারণের জন্য ভ্যাকুয়াম গরম করা হয়, অবশেষে লক্ষ্য পেপটাইড ধারণকারী একটি দ্রবণ লাভ করে, যা তারপর কঠিন বরফ স্ফটিক গঠনের জন্য একটি ফ্রিজারে স্থাপন করা হয়।

ফ্রিজ-ড্রাইং সিস্টেম: কঠিন বরফের স্ফটিক ধারণকারী পাত্রগুলিকে ফ্রিজ-ড্রায়ারের ট্রে বা ভ্যাকুয়াম পোর্টে রাখা হয়। একটি ভ্যাকুয়াম পরিবেশে, পেপটাইড পণ্যটি সাবলিমেটেড হয়, শেষ পর্যন্ত কঠিন পেপটাইড পাউডার পাওয়া যায়।

পেপটাইড স্ফটিকগুলি ফ্রিজ-ড্রায়ারের মধ্যে ফ্রিজ-শুকানোর জন্য প্রস্তুত।