Peptidrensening

For at få peptider med specifikke aminosyresekvenser bruger vi Fmoc-SPPS-metoden (solid-fase-peptidsyntese).

baggrund:

Peptider er bioaktive stoffer, der har forbindelse til forskellige cellefunktioner i biologiske organismer. Deres molekylære struktur ligger mellem aminosyrer og proteiner, bestående af flere aminosyrer arrangeret i en bestemt rækkefølge og forbundet ved peptidbindinger (—NH—CO—). Sammensætninger dannet af to aminosyre-molekyler gennem dehydrationskondensation kaldes dipeptider, på samme måde findes der tripeptider, tetrapeptider, pentapeptider og så videre op til nonapeptider. Sammensætninger typisk dannet af 10 til 100 aminosyre-molekyler gennem dehydrationskondensation kaldes polypeptider.

Peptide tilpasnings services henviser til syntesen af peptide baseret på kundens krav, såsom sekvens, renehed, molekylvægt og saltindhold, for at opfylde specifikke behov. Molekylvægten bekræftes ved massespektrometri for at sikre korrektheden af det råe MS, efterfulgt af reningsprocessen ved hjælp af et højydelsevnes flydende kromatografi system, derefter koncentration og lyofilisering for at få det fine peptidpulver.

For at få peptide med specifikke aminosyresekvenser bruger vi Fmoc-SPPS-metoden (solid fase peptidsyntese). Under solid fasesyntesen introduceres en gruppe, der kan reagere med karboksylgrupper på den faste fasebærer for at reagere med det aminobeskyttede amino, hvilket anker den første aminosyre til resinen. Reaktionen udføres derefter fra C-enden til N-enden for at fuldføre syntesen af målpeptidsekvensen.

Reningmetoder:

Vores virksomhed bruger et højydelsevindende væskechromatografi-system med en omvendt C18-præparationskolonne til adskillelse og rense, følgende disse trin:

identifikation: Tag en lille mængde rå peptid til massespektrometri for at bekræfte tilstedeværelsen af målpeptidet (hvis ja, bekræft dets holdetid i C18-kolonnen gennem analytisk chromatografi; hvis nej, gensynthesér den rå peptid).

Opløsning: Brug ultralydshjælp til opløsning, typisk ved at vælge 90% vand + 10% acetonitril (methanol eller isopropanol). Ved vanskelig opløselighed, tilføj passende mængde syrlig syre eller trifluoracetylsyre for at hjælpe med opløsningen, hvis sekvensen har en høj andel basale aminosyrer; tilføj passende ammonia-vand, hvis surlige aminosyrer dominerer. Brug DMSO (dimetyl sulfoxid), hvis hydrofobe aminosyrer dominerer.

Filtrering: Filtrer det opløste råprodukt gennem en 0,45 µm filtrationsmembran (for at beskytte præparationskolonnen) til senere brug.

Prøveindsættelse: Brug det højydelsevne-liquid prepareringsanlæg til at indføre den væske prøve i prepareringskolonnen.

Elution: På baggrund af elutionsgradienten, der blev afgjort i trin 1), adskil de stoffer fra peptider ved hjælp af polaritetsforskelle mellem peptider af forskellig længde.

Fordele ved at bruge et højydelsevne-liquid chromatografi-anlæg:

Højere opdelingsgrad end andre chromatografimetoder; C18-prepareringskolonnen, der bruges, har høj kolonneeffektivitet, lang levetid og god reproducerbarhed, hvilket gør det muligt at bruge gentagne gange; hurtig hastighed og høj effektivitet, hvor hver prøve renes inden for minutter eller ti-minutters intervaller; bred anvendelse og modent teknologi inden for revers-phase chromatografi, hvilket giver god selektivitet for forskellige typer organiske forbindelser.

Rå-peptidrense og lyofilisering:

Den råe peptid adskilles og renes ved hjælp af et højydelsevindende væskechromatografi-præparationsanlæg og analyseres med hensyn til renehed ved hjælp af en højydelsevindende væskechromatograf (HPLC) for at få de kvalificerede væskemikrokomponenter.

Rotationsevaporationssystem: Den kvalificerede væskemikrokomponent udsættes for vakuumvarme for at fjerne lette volatile organiske solventer, hvorefter der endeligt opnås en løsning, der indeholder målpeptidet, som derefter placeres i en fryser for at danne faste iskrystaller.

Frysepåtørkningssystem: Beholdere med faste iskrystaller placeres på frysepåtørkningspladen eller vakuumporten. I en vakuummiljø sublimeres peptidproduktet, hvilket endeligt giver fast peptidpulver.

Peptidkrystallerne er klar til frysepåtørkning i frysepåtørkeren.