Peptidrensning Danmark

For at opnå peptider med specifikke aminosyresekvenser bruger vi Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis) metoden.

Baggrund:

Peptider er bioaktive stoffer relateret til forskellige cellulære funktioner i biologiske organismer. Deres molekylære struktur ligger mellem aminosyrer og proteiner, bestående af flere aminosyrer arrangeret i en bestemt rækkefølge og forbundet med peptidbindinger (—NH—CO—). Forbindelser dannet ved dehydreringskondensering af to aminosyremolekyler kaldes dipeptider, ligesom der er tripeptider, tetrapeptider, pentapeptider og så videre, op til nonapeptider. Forbindelser, der typisk fremstilles fra 10 til 100 aminosyremolekyler gennem dehydreringskondensering, kaldes polypeptider.

Peptide-tilpassede tjenester refererer til syntesen af ​​peptider baseret på kundekrav, såsom sekvens, renhed, molekylvægt og saltindhold, for at opfylde specifikke behov. Molekylvægten bekræftes ved massespektrometri for at sikre rigtigheden af ​​den rå MS, efterfulgt af oprensning ved hjælp af et højtydende væskekromatografisystem, derefter koncentration og lyofilisering for at opnå det fine peptidpulver.

For at opnå peptider med specifikke aminosyresekvenser bruger vi Fmoc-SPPS (solid-phase peptide syntese) metoden. Under fastfasesyntese indføres en gruppe, der er i stand til at reagere med carboxylgrupper, på fastfasebæreren for at reagere med den aminobeskyttede amino, hvorved den første aminosyre forankres til harpiksen. Reaktionen afsluttes derefter fra C-enden til N-enden for at fuldende målpeptidsekvenssyntesen.

Oprensningsmetoder:

Vores virksomhed anvender et højtydende væskekromatografisystem med en omvendt C18-forberedende kolonne til separation og oprensning ved at følge disse trin:

Identifikation:Tag en lille mængde råt peptid til massespektrometri for at bekræfte tilstedeværelsen af ​​målpeptidet (hvis ja, bekræft dets retentionstid i C18-søjlen gennem analytisk kromatografi; hvis nej, resyntetiser råpeptidet).

Opløsning:Brug ultralydsassistance til opløsning, og vælg typisk 90 % vand + 10 % acetonitril (methanol eller isopropanol). For vanskelig opløselighed tilsættes passende eddikesyre eller trifluoreddikesyre for at hjælpe med opløsning, hvis sekvensen har en højere andel af basiske aminosyrer; tilsæt passende ammoniakvand, hvis sure aminosyrer er fremherskende. Brug DMSO (dimethylsulfoxid), hvis hydrofobe aminosyrer er fremherskende.

Filtrering:Filtrer det opløste råprodukt gennem en 0.45 µm filtermembran (for at beskytte den forberedende søjle) til senere brug.

Prøveindlæsning:Brug det højtydende flydende forberedelsessystem til at indføre væskeprøven i den forberedende kolonne.

Eluering:Baseret på elueringsgradienten bestemt i trin 1), adskille urenhederne fra peptider ved hjælp af polaritetsforskellene for peptider med varierende længde.

Fordele ved at bruge et højtydende væskekromatografisystem:

Højere opløsning end andre kromatografimetoder; den anvendte C18 forberedende kolonne har høj kolonneeffektivitet, lang levetid og god reproducerbarhed, hvilket muliggør gentagen brug; hurtig hastighed og høj effektivitet, hvor hver prøve renses inden for få minutter eller ti minutter; bred anvendelse og moden teknologi inden for omvendt fasekromatografi, der tilbyder god selektivitet for forskellige typer organiske forbindelser.

Oprensning og lyofilisering af rå peptid:

Det rå peptid separeres og renses ved hjælp af et højtydende væskekromatografi-forberedende system og analyseres for renhed ved hjælp af en højtydende væskekromatograf (HPLC) for at opnå de kvalificerede væskekomponenter.

Roterende fordampningssystem: Den kvalificerede flydende komponent udsættes for vakuumopvarmning for at fjerne let flygtige organiske opløsningsmidler, og til sidst opnås en opløsning indeholdende målpeptidet, som derefter placeres i en fryser for at danne faste iskrystaller.

Frysetørresystem: Beholdere med faste iskrystaller placeres på frysetørrerbakken eller vakuumporten. I et vakuummiljø sublimeres peptidproduktet, hvilket i sidste ende giver fast peptidpulver.

Peptidkrystallerne er klar til frysetørring i frysetørreren.