Καθαρισμός πεπτιδίου Ελλάδα

Για να λάβουμε πεπτίδια με συγκεκριμένες αλληλουχίες αμινοξέων, χρησιμοποιούμε τη μέθοδο Fmoc-SPPS (σύνθεση πεπτιδίων στερεάς φάσης).

Ιστορικό:

Τα πεπτίδια είναι βιοδραστικές ουσίες που σχετίζονται με διάφορες κυτταρικές λειτουργίες σε βιολογικούς οργανισμούς. Η μοριακή τους δομή βρίσκεται μεταξύ αμινοξέων και πρωτεϊνών, αποτελούμενη από πολλαπλά αμινοξέα διατεταγμένα σε συγκεκριμένη σειρά και συνδεδεμένα με πεπτιδικούς δεσμούς (—NH—CO—). Οι ενώσεις που σχηματίζονται από τη συμπύκνωση αφυδάτωσης δύο μορίων αμινοξέων ονομάζονται διπεπτίδια, ομοίως, υπάρχουν τριπεπτίδια, τετραπεπτίδια, πενταπεπτίδια και ούτω καθεξής, μέχρι εννεαπεπτίδια. Οι ενώσεις που παράγονται συνήθως από 10 έως 100 μόρια αμινοξέων μέσω συμπύκνωσης αφυδάτωσης ονομάζονται πολυπεπτίδια.

Οι προσαρμοσμένες υπηρεσίες πεπτιδίων αναφέρονται στη σύνθεση πεπτιδίων με βάση τις απαιτήσεις των πελατών, όπως η αλληλουχία, η καθαρότητα, το μοριακό βάρος και η περιεκτικότητα σε άλατα, για την κάλυψη συγκεκριμένων αναγκών. Το μοριακό βάρος επιβεβαιώνεται με φασματομετρία μάζας για να εξασφαλιστεί η ορθότητα του ακατέργαστου MS, που ακολουθείται από καθαρισμό χρησιμοποιώντας ένα σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης, στη συνέχεια συμπύκνωση και λυοφιλοποίηση για να ληφθεί η λεπτή σκόνη πεπτιδίου.

Για να λάβουμε πεπτίδια με συγκεκριμένες αλληλουχίες αμινοξέων, χρησιμοποιούμε τη μέθοδο Fmoc-SPPS (σύνθεση πεπτιδίων στερεάς φάσης). Κατά τη διάρκεια της σύνθεσης στερεάς φάσης, μια ομάδα ικανή να αντιδρά με καρβοξυλικές ομάδες εισάγεται στον φορέα στερεάς φάσης για να αντιδράσει με το αμινο-προστατευμένο αμινοξύ, αγκυρώνοντας το πρώτο αμινοξύ στη ρητίνη. Η αντίδραση στη συνέχεια ολοκληρώνεται από το C-άκρο στο Ν-άκρο για να ολοκληρωθεί η σύνθεση της πεπτιδικής αλληλουχίας στόχου.

Μέθοδοι καθαρισμού:

Η εταιρεία μας χρησιμοποιεί ένα σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης με αντίστροφη προπαρασκευαστική στήλη C18 για διαχωρισμό και καθαρισμό, ακολουθώντας τα εξής βήματα:

Ταυτοποίηση:Πάρτε μια μικρή ποσότητα ακατέργαστου πεπτιδίου για φασματομετρία μάζας για να επιβεβαιώσετε την παρουσία του πεπτιδίου στόχου (εάν ναι, επιβεβαιώστε τον χρόνο κατακράτησης του στη στήλη C18 μέσω αναλυτικής χρωματογραφίας· εάν όχι, συνθέστε εκ νέου το ακατέργαστο πεπτίδιο).

Διάλυση:Χρησιμοποιήστε βοήθεια υπερήχων για διάλυση, επιλέγοντας συνήθως 90% νερό + 10% ακετονιτρίλιο (μεθανόλη ή ισοπροπανόλη). Για δύσκολη διαλυτότητα, προσθέστε κατάλληλο οξικό οξύ ή τριφθοροξικό οξύ για να βοηθήσετε τη διάλυση εάν η αλληλουχία έχει υψηλότερη αναλογία βασικών αμινοξέων. προσθέστε κατάλληλο αμμωνιακό νερό εάν τα όξινα αμινοξέα είναι κυρίαρχα. Χρησιμοποιήστε DMSO (διμεθυλοσουλφοξείδιο) εάν κυριαρχούν τα υδρόφοβα αμινοξέα.

Διήθηση:Διηθήστε το διαλυμένο ακατέργαστο προϊόν μέσω μιας μεμβράνης φίλτρου 0.45 μm (για προστασία της προπαρασκευαστικής στήλης) για μελλοντική χρήση.

Φόρτωση δείγματος:Χρησιμοποιήστε το σύστημα προετοιμασίας υγρών υψηλής απόδοσης για να εισάγετε το υγρό δείγμα στην προπαρασκευαστική στήλη.

Έκλουση:Με βάση τη βαθμίδα έκλουσης που προσδιορίζεται στο βήμα 1), διαχωρίστε τις ακαθαρσίες από τα πεπτίδια χρησιμοποιώντας τις διαφορές πολικότητας των πεπτιδίων ποικίλου μήκους.

Πλεονεκτήματα της χρήσης ενός συστήματος υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης:

Υψηλότερη ανάλυση από άλλες μεθόδους χρωματογραφίας. η χρησιμοποιούμενη προπαρασκευαστική στήλη C18 έχει υψηλή απόδοση στήλης, μεγάλη διάρκεια ζωής και καλή αναπαραγωγιμότητα, επιτρέποντας την επαναλαμβανόμενη χρήση. γρήγορη ταχύτητα και υψηλή απόδοση, με κάθε δείγμα να καθαρίζεται μέσα σε λίγα λεπτά ή δεκάδες λεπτά. ευρεία εφαρμογή και ώριμη τεχνολογία χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης, προσφέροντας καλή εκλεκτικότητα για διάφορους τύπους οργανικών ενώσεων.

Καθαρισμός και λυοφιλοποίηση ακατέργαστου πεπτιδίου:

Το ακατέργαστο πεπτίδιο διαχωρίζεται και καθαρίζεται χρησιμοποιώντας ένα προπαρασκευαστικό σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης και αναλύεται για καθαρότητα χρησιμοποιώντας υγρό χρωματογράφο υψηλής απόδοσης (HPLC) για να ληφθούν τα κατάλληλα υγρά συστατικά.

Περιστροφικό σύστημα εξάτμισης: Το κατάλληλο υγρό συστατικό υποβάλλεται σε θέρμανση υπό κενό για την απομάκρυνση των εύκολα πτητικών οργανικών διαλυτών, λαμβάνοντας τελικά ένα διάλυμα που περιέχει το πεπτίδιο στόχο, το οποίο στη συνέχεια τοποθετείται σε καταψύκτη για να σχηματίσει στερεούς κρυστάλλους πάγου.

Σύστημα Freeze-Drying: Τα δοχεία που συγκρατούν τους στερεούς κρυστάλλους πάγου τοποθετούνται στον δίσκο λυοφιλοποίησης ή στη θύρα κενού. Σε περιβάλλον κενού, το πεπτιδικό προϊόν εξαχνώνεται, δίνοντας τελικά στερεή σκόνη πεπτιδίου.

Οι πεπτιδικοί κρύσταλλοι είναι έτοιμοι για ξήρανση με κατάψυξη στον λυοφιλοποιητή.