पेप्टाइड शुद्धिकरण भारत

विशिष्ट अमीनो एसिड अनुक्रमों के साथ पेप्टाइड्स प्राप्त करने के लिए, हम Fmoc-SPPS (ठोस-चरण पेप्टाइड संश्लेषण) विधि का उपयोग करते हैं।

पृष्ठभूमि:

पेप्टाइड्स जैविक जीवों में विभिन्न सेलुलर कार्यों से संबंधित बायोएक्टिव पदार्थ हैं। उनकी आणविक संरचना अमीनो एसिड और प्रोटीन के बीच होती है, जिसमें एक विशिष्ट क्रम में व्यवस्थित कई अमीनो एसिड होते हैं और पेप्टाइड बॉन्ड (-एनएच-सीओ-) से जुड़े होते हैं। दो अमीनो एसिड अणुओं के निर्जलीकरण संघनन से बनने वाले यौगिकों को डाइपेप्टाइड्स कहा जाता है, इसी तरह, ट्राइपेप्टाइड्स, टेट्रापेप्टाइड्स, पेंटापेप्टाइड्स और इसी तरह नॉनपेप्टाइड्स भी होते हैं। आमतौर पर निर्जलीकरण संघनन के माध्यम से 10 से 100 अमीनो एसिड अणुओं से बने यौगिकों को पॉलीपेप्टाइड्स कहा जाता है।

पेप्टाइड कस्टम सेवाएँ विशिष्ट आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए ग्राहकों की आवश्यकताओं, जैसे अनुक्रम, शुद्धता, आणविक भार और नमक सामग्री के आधार पर पेप्टाइड्स के संश्लेषण को संदर्भित करती हैं। क्रूड एमएस की शुद्धता सुनिश्चित करने के लिए मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा आणविक भार की पुष्टि की जाती है, इसके बाद उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी प्रणाली का उपयोग करके शुद्धिकरण किया जाता है, फिर ठीक पेप्टाइड पाउडर प्राप्त करने के लिए एकाग्रता और लियोफिलाइजेशन किया जाता है।

विशिष्ट अमीनो एसिड अनुक्रमों के साथ पेप्टाइड्स प्राप्त करने के लिए, हम Fmoc-SPPS (ठोस-चरण पेप्टाइड संश्लेषण) विधि का उपयोग करते हैं। ठोस-चरण संश्लेषण के दौरान, कार्बोक्जिलिक समूहों के साथ प्रतिक्रिया करने में सक्षम एक समूह को अमीनो-संरक्षित अमीनो के साथ प्रतिक्रिया करने के लिए ठोस-चरण वाहक पर पेश किया जाता है, जो पहले अमीनो एसिड को राल में जोड़ता है। लक्ष्य पेप्टाइड अनुक्रम संश्लेषण को पूरा करने के लिए प्रतिक्रिया सी-एंड से एन-एंड तक पूरी की जाती है।

शुद्धिकरण के तरीके:

हमारी कंपनी इन चरणों का पालन करते हुए पृथक्करण और शुद्धिकरण के लिए रिवर्स C18 प्रारंभिक कॉलम के साथ एक उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी प्रणाली का उपयोग करती है:

पहचान:लक्ष्य पेप्टाइड की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए मास स्पेक्ट्रोमेट्री के लिए क्रूड पेप्टाइड की थोड़ी मात्रा लें (यदि हाँ, तो विश्लेषणात्मक क्रोमैटोग्राफी के माध्यम से C18 कॉलम में इसके अवधारण समय की पुष्टि करें; यदि नहीं, तो क्रूड पेप्टाइड को पुन: संश्लेषित करें)।

विघटन:विघटन के लिए अल्ट्रासोनिक सहायता का उपयोग करें, आमतौर पर 90% पानी + 10% एसीटोनिट्राइल (मेथनॉल या आइसोप्रोपेनॉल) का चयन करें। कठिन घुलनशीलता के लिए, यदि अनुक्रम में मूल अमीनो एसिड का अनुपात अधिक है तो विघटन में सहायता के लिए उचित एसिटिक एसिड या ट्राइफ्लूरोएसेटिक एसिड जोड़ें; यदि अम्लीय अमीनो एसिड प्रबल हो तो उचित अमोनिया पानी मिलाएं। यदि हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड प्रबल हो तो डीएमएसओ (डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड) का उपयोग करें।

छानने का काम:बाद में उपयोग के लिए 0.45 µm फ़िल्टर झिल्ली (प्रारंभिक कॉलम की सुरक्षा के लिए) के माध्यम से घुले हुए कच्चे उत्पाद को फ़िल्टर करें।

नमूना लोड हो रहा है:प्रारंभिक कॉलम में तरल नमूने को इनपुट करने के लिए उच्च-प्रदर्शन तरल तैयारी प्रणाली का उपयोग करें।

रेफरेंस:चरण 1 में निर्धारित निक्षालन प्रवणता के आधार पर, अलग-अलग लंबाई के पेप्टाइड्स के ध्रुवीय अंतर का उपयोग करके पेप्टाइड्स से अशुद्धियों को अलग करें।

उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी प्रणाली का उपयोग करने के लाभ:

अन्य क्रोमैटोग्राफी विधियों की तुलना में उच्च रिज़ॉल्यूशन; उपयोग किए गए C18 प्रारंभिक कॉलम में उच्च कॉलम दक्षता, लंबी सेवा जीवन और अच्छी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता है, जो बार-बार उपयोग की अनुमति देता है; तेज़ गति और उच्च दक्षता, प्रत्येक नमूने को मिनटों या दसियों मिनटों के भीतर शुद्ध किया जाता है; रिवर्स-चरण क्रोमैटोग्राफी का व्यापक अनुप्रयोग और परिपक्व तकनीक, विभिन्न प्रकार के कार्बनिक यौगिकों के लिए अच्छी चयनात्मकता प्रदान करती है।

क्रूड पेप्टाइड शुद्धिकरण और लियोफिलाइजेशन:

क्रूड पेप्टाइड को उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी तैयारी प्रणाली का उपयोग करके अलग और शुद्ध किया जाता है और योग्य तरल घटकों को प्राप्त करने के लिए उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफ (एचपीएलसी) का उपयोग करके शुद्धता के लिए विश्लेषण किया जाता है।

रोटरी वाष्पीकरण प्रणाली: आसानी से अस्थिर कार्बनिक सॉल्वैंट्स को हटाने के लिए योग्य तरल घटक को वैक्यूम हीटिंग के अधीन किया जाता है, अंत में लक्ष्य पेप्टाइड युक्त एक समाधान प्राप्त होता है, जिसे ठोस बर्फ क्रिस्टल बनाने के लिए फ्रीजर में रखा जाता है।

फ़्रीज़-सुखाने की प्रणाली: ठोस बर्फ के क्रिस्टल रखने वाले कंटेनरों को फ़्रीज़-ड्रायर ट्रे या वैक्यूम पोर्ट पर रखा जाता है। निर्वात वातावरण में, पेप्टाइड उत्पाद को उर्ध्वपातित किया जाता है, जिससे अंततः ठोस पेप्टाइड पाउडर प्राप्त होता है।

पेप्टाइड क्रिस्टल फ़्रीज़-ड्रायर में फ़्रीज़-सुखाने के लिए तैयार हैं।