Peptid tisztítás Magyarország

Specifikus aminosavszekvenciájú peptidek előállításához az Fmoc-SPPS (szilárd fázisú peptidszintézis) módszert alkalmazzuk.

Háttér:

A peptidek olyan bioaktív anyagok, amelyek a biológiai szervezetek különböző sejtfunkcióihoz kapcsolódnak. Molekulaszerkezetük aminosavak és fehérjék között helyezkedik el, több aminosavból állnak, amelyek meghatározott sorrendben vannak elrendezve, és peptidkötésekkel (—NH—CO—) kapcsolódnak egymáshoz. A két aminosavmolekula dehidratációs kondenzációjával keletkező vegyületeket dipeptideknek nevezzük, hasonlóképpen léteznek tripeptidek, tetrapeptidek, pentapeptidek stb., egészen a nonapeptidekig. Azokat a vegyületeket, amelyek jellemzően 10-100 aminosavból állnak dehidratációs kondenzációval, polipeptideknek nevezzük.

A peptidek egyedi szolgáltatásai a peptidek szintézisét jelentik az ügyfelek igényei szerint, mint például a szekvencia, tisztaság, molekulatömeg és sótartalom, az egyedi igények kielégítése érdekében. A molekulatömeget tömegspektrometriával igazoljuk, hogy biztosítsuk a nyers MS helyességét, amit nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás rendszerrel történő tisztítás, majd betöményítés és liofilizálás követ, hogy megkapjuk a finom peptidport.

Specifikus aminosavszekvenciájú peptidek előállításához az Fmoc-SPPS (szilárd fázisú peptidszintézis) módszert alkalmazzuk. A szilárd fázisú szintézis során a szilárd fázisú hordozóra egy karboxilcsoportokkal reagálni képes csoportot viszünk be, amely reakcióba lép az aminocsoporttal védett aminocsoporttal, rögzítve az első aminosavat a gyantához. A reakciót ezután a C-végtől az N-végig fejezzük be a célpeptid szekvencia szintézisének befejezéséhez.

Tisztítási módszerek:

Cégünk nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás rendszert használ fordított C18 előkészítő oszloppal az elválasztáshoz és tisztításhoz, az alábbi lépéseket követve:

Azonosítás:Vegyen egy kis mennyiségű nyers peptidet tömegspektrometriához, hogy megerősítse a célpeptid jelenlétét (ha igen, erősítse meg a retenciós idejét a C18 oszlopban analitikai kromatográfiával; ha nem, szintetizálja újra a nyers peptidet).

Pusztulás:Használjon ultrahangos segédeszközt az oldáshoz, jellemzően 90% víz + 10% acetonitril (metanol vagy izopropanol) arányban. A nehéz oldhatóság érdekében adjunk hozzá megfelelő ecetsavat vagy trifluor-ecetsavat az oldódás elősegítésére, ha a szekvencia nagyobb arányban tartalmaz bázikus aminosavakat; adjunk hozzá megfelelő ammóniás vizet, ha a savas aminosavak dominálnak. Használjon DMSO-t (dimetil-szulfoxidot), ha a hidrofób aminosavak vannak túlsúlyban.

Szűrés:Szűrjük át az oldott nyersterméket egy 0.45 µm-es szűrőmembránon (az előkészítő oszlop védelme érdekében) későbbi felhasználás céljából.

Minta betöltés:Használja a nagy teljesítményű folyadék-előkészítő rendszert, hogy a folyadékmintát az előkészítő oszlopba vigye.

Elúció:Az 1. lépésben meghatározott elúciós gradiens alapján válassza el a szennyeződéseket a peptidektől a változó hosszúságú peptidek polaritáskülönbségei alapján.

A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás rendszer használatának előnyei:

Más kromatográfiás módszereknél nagyobb felbontás; a felhasznált C18 előkészítő oszlop nagy oszlophatékonysággal, hosszú élettartammal és jó reprodukálhatósággal rendelkezik, ami lehetővé teszi az ismételt felhasználást; gyors sebesség és nagy hatékonyság, minden egyes minta percek vagy tíz percek alatt megtisztul; a fordított fázisú kromatográfia széles körű alkalmazása és kiforrott technológiája, amely jó szelektivitást kínál különféle típusú szerves vegyületekre.

Nyers peptid tisztítás és liofilizálás:

A nyers peptidet elválasztják és tisztítják egy nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás előkészítő rendszerrel, és tisztaságát nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC) analizálják, hogy megkapják a minősített folyékony komponenseket.

Rotációs bepárlórendszer: A minősített folyékony komponenst vákuummelegítésnek vetik alá, hogy eltávolítsák a könnyen illékony szerves oldószereket, végül a célpeptidet tartalmazó oldatot kapják, amelyet azután fagyasztóba helyeznek, hogy szilárd jégkristályokat képezzenek.

Fagyasztva szárító rendszer: A szilárd jégkristályokat tároló tartályokat a fagyasztva szárító tálcájára vagy a vákuumnyílásra kell helyezni. Vákuumos környezetben a peptidtermék szublimálódik, és végül szilárd peptidpor keletkezik.

A peptidkristályok készen állnak a fagyasztva szárításra a fagyasztva szárítóban.