Pemurnian Peptida Indonesia

Untuk mendapatkan peptida dengan urutan asam amino tertentu, kami menggunakan metode Fmoc-SPPS (sintesis peptida fase padat).

Latar Belakang:

Peptida adalah zat bioaktif yang berkaitan dengan berbagai fungsi seluler dalam organisme biologis. Struktur molekulnya terletak di antara asam amino dan protein, terdiri dari beberapa asam amino yang disusun dalam urutan tertentu dan dihubungkan oleh ikatan peptida (—NH—CO—). Senyawa yang terbentuk dari hasil kondensasi dehidrasi dua molekul asam amino disebut dipeptida, begitu pula ada tripeptida, tetrapeptida, pentapeptida, dan sebagainya, hingga nonapeptida. Senyawa yang biasanya dibuat dari 10 hingga 100 molekul asam amino melalui kondensasi dehidrasi disebut polipeptida.

Layanan khusus peptida mengacu pada sintesis peptida berdasarkan kebutuhan pelanggan, seperti urutan, kemurnian, berat molekul, dan kandungan garam, untuk memenuhi kebutuhan spesifik. Berat molekul dikonfirmasi dengan spektrometri massa untuk memastikan kebenaran MS mentah, diikuti dengan pemurnian menggunakan sistem kromatografi cair kinerja tinggi, kemudian konsentrasi, dan liofilisasi untuk mendapatkan bubuk peptida halus.

Untuk mendapatkan peptida dengan urutan asam amino tertentu, kami menggunakan metode Fmoc-SPPS (sintesis peptida fase padat). Selama sintesis fase padat, gugus yang mampu bereaksi dengan gugus karboksilat dimasukkan pada pembawa fase padat untuk bereaksi dengan amino yang dilindungi amino, mengikat asam amino pertama ke resin. Reaksi kemudian diselesaikan dari ujung C ke ujung N untuk menyelesaikan sintesis urutan peptida target.

Metode Pemurnian:

Perusahaan kami menggunakan sistem kromatografi cair kinerja tinggi dengan kolom persiapan C18 terbalik untuk pemisahan dan pemurnian, dengan mengikuti langkah-langkah berikut:

Identifikasi:Ambil sejumlah kecil peptida mentah untuk spektrometri massa guna memastikan keberadaan peptida target (jika ya, konfirmasikan waktu retensinya dalam kolom C18 melalui kromatografi analitik; jika tidak, sintesis ulang peptida mentah tersebut).

Pembubaran:Gunakan bantuan ultrasonik untuk pelarutan, biasanya memilih 90% air + 10% asetonitril (metanol atau isopropanol). Untuk kelarutan yang sulit, tambahkan asam asetat atau asam trifluoroasetat yang sesuai untuk membantu pembubaran jika rangkaian tersebut memiliki proporsi asam amino basa yang lebih tinggi; tambahkan air amonia yang sesuai jika asam amino asam dominan. Gunakan DMSO (dimetil sulfoksida) jika asam amino hidrofobik lebih dominan.

Penyaringan:Saring produk kasar terlarut melalui membran filter 0.45 µm (untuk melindungi kolom persiapan) untuk digunakan nanti.

Pemuatan Sampel:Gunakan sistem persiapan cairan berkinerja tinggi untuk memasukkan sampel cairan ke dalam kolom persiapan.

Elusi:Berdasarkan gradien elusi yang ditentukan pada langkah 1), pisahkan pengotor dari peptida menggunakan perbedaan polaritas dari berbagai panjang peptida.

Keuntungan menggunakan sistem kromatografi cair kinerja tinggi:

Resolusi lebih tinggi dibandingkan metode kromatografi lainnya; kolom persiapan C18 yang digunakan memiliki efisiensi kolom yang tinggi, masa pakai yang lama, dan kemampuan reproduksi yang baik, memungkinkan penggunaan berulang; kecepatan cepat dan efisiensi tinggi, dengan setiap sampel dimurnikan dalam hitungan menit atau puluhan menit; penerapan luas dan teknologi kromatografi fase terbalik yang matang, menawarkan selektivitas yang baik untuk berbagai jenis senyawa organik.

Pemurnian dan Liofilisasi Peptida Kasar:

Peptida mentah dipisahkan dan dimurnikan menggunakan sistem persiapan kromatografi cair kinerja tinggi dan dianalisis kemurniannya menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) untuk mendapatkan komponen cairan yang memenuhi syarat.

Sistem Evaporasi Putar: Komponen cairan yang memenuhi syarat dikenakan pemanasan vakum untuk menghilangkan pelarut organik yang mudah menguap, akhirnya memperoleh larutan yang mengandung peptida target, yang kemudian ditempatkan dalam freezer untuk membentuk kristal es padat.

Sistem Pengeringan Beku: Wadah yang menampung kristal es padat ditempatkan pada baki pengering beku atau lubang vakum. Dalam lingkungan vakum, produk peptida disublimasikan, yang pada akhirnya menghasilkan bubuk peptida padat.

Kristal peptida siap untuk dikeringkan dalam freezer.