Pemurnian Peptida

Untuk mendapatkan peptida dengan urutan asam amino tertentu, kami menggunakan metode Fmoc-SPPS (sintesis peptida fase padat).

Latar Belakang:

Peptida adalah zat biologis aktif yang terkait dengan berbagai fungsi seluler dalam organisme biologis. Struktur molekulnya berada di antara asam amino dan protein, terdiri dari beberapa asam amino yang disusun dalam urutan tertentu dan dihubungkan oleh ikatan peptida (—NH—CO—). Senyawa yang terbentuk dari kondensasi dehidrasi dua molekul asam amino disebut dipeptida, demikian pula ada tripeptida, tetrapeptida, pentapeptida, dan seterusnya, hingga nonapeptida. Senyawa yang biasanya terbentuk dari 10 hingga 100 molekul asam amino melalui kondensasi dehidrasi disebut polipeptida.

Layanan peptida kustom merujuk pada sintesis peptida berdasarkan permintaan pelanggan, seperti urutan, kekayaan, berat molekul, dan kandungan garam, untuk memenuhi kebutuhan tertentu. Berat molekul dikonfirmasi dengan spektrometri massa untuk memastikan kebenaran MS kasar, diikuti dengan pemurnian menggunakan sistem kromatografi cair bertingkat tinggi, kemudian pengkonsentrasian, dan liofilisasi untuk mendapatkan bubuk peptida halus.

Untuk memperoleh peptida dengan urutan asam amino tertentu, kami menggunakan metode Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis). Selama sintesis fase padat, kelompok yang mampu bereaksi dengan kelompok karboksil diperkenalkan pada pembawa fase padat untuk bereaksi dengan asam amino yang dilindungi amina, menempelkan asam amino pertama ke resin. Reaksi kemudian diselesaikan dari ujung C ke ujung N untuk menyelesaikan sintesis urutan peptida target.

Metode Pemurnian:

Perusahaan kami menggunakan sistem kromatografi cair berkinerja tinggi dengan kolom preparatif C18 terbalik untuk pemisahan dan pemurnian, mengikuti langkah-langkah berikut:

identifikasi: Ambil sejumlah kecil peptida kasar untuk spektrometri massa guna mengonfirmasi keberadaan peptida target (jika ya, konfirmasikan waktu retensi di kolom C18 melalui kromatografi analitis; jika tidak, sintesis ulang peptida kasar).

Pelarutan: Gunakan bantuan ultrasonik untuk pelarutan, biasanya memilih 90% air + 10% asetonitril (metanol atau isopropanol). Untuk larutan yang sulit, tambahkan asam asetik atau asam trifluoroasetat yang sesuai untuk membantu pelarutan jika urutan memiliki proporsi lebih besar dari asam amino basa; tambahkan air ammonia yang sesuai jika asam amino asam mendominasi. Gunakan DMSO (dimethyl sulfoxide) jika asam amino hidrofob mendominasi.

Penyaringan: Saring produk kasar yang telah dilarutkan melalui membran filter 0.45 µm (untuk melindungi kolom preparatif) untuk digunakan nanti.

Pemuatan Sampel: Gunakan sistem cair pra-persiapan berkinerja tinggi untuk memasukkan sampel cair ke dalam kolom pra-persiapan.

Elusi: Berdasarkan gradien elusi yang ditentukan pada langkah 1), pisahkan kontaminan dari peptida menggunakan perbedaan polaritas peptida dengan panjang berbeda.

Keuntungan menggunakan sistem kromatografi cair berkinerja tinggi:

Resolusi lebih tinggi dibandingkan metode kromatografi lainnya; kolom pra-persiapan C18 yang digunakan memiliki efisiensi kolom tinggi, umur panjang, dan reproduktivitas baik, memungkinkan penggunaan berulang; kecepatan tinggi dan efisiensi tinggi, dengan setiap sampel dipurifikasi dalam beberapa menit atau puluhan menit; aplikasi luas dan teknologi kromatografi fase terbalik yang matang, menawarkan selektivitas baik untuk berbagai jenis senyawa organik.

Pemurnian dan Lisifikasi Peptida Kasar:

Peptida kasar dipisahkan dan dimurnikan menggunakan sistem kromatografi cair berkinerja tinggi preparatif dan dianalisis untuk kemurniannya menggunakan kromatografi cair berkinerja tinggi (HPLC) untuk memperoleh komponen cair yang memenuhi syarat.

Sistem Evolusi Putar: Komponen cair yang memenuhi syarat dikenai pemanasan vakum untuk menghilangkan pelarut organik yang mudah menguap, akhirnya memperoleh larutan yang mengandung peptida target, yang kemudian ditempatkan di freezer untuk membentuk kristal es padat.

Sistem Freeze-Drying: Wadah yang berisi kristal es padat ditempatkan di loyang freeze-dryer atau port vakum. Dalam lingkungan vakum, produk peptida disublimasi, pada akhirnya menghasilkan bubuk peptida padat.

Kristal peptida siap untuk difreeze-dry dalam freeze-dryer.