Purificazione dei peptidi Italia

Per ottenere peptidi con sequenze amminoacidiche specifiche, utilizziamo il metodo Fmoc-SPPS (sintesi peptidica in fase solida).

Sfondo:

I peptidi sono sostanze bioattive legate a varie funzioni cellulari negli organismi biologici. La loro struttura molecolare si trova tra amminoacidi e proteine, costituite da più amminoacidi disposti in un ordine specifico e collegati da legami peptidici (—NH—CO—). I composti formati dalla condensazione per disidratazione di due molecole di amminoacidi sono chiamati dipeptidi, analogamente ci sono tripeptidi, tetrapeptidi, pentapeptidi e così via, fino ai nonapeptidi. I composti tipicamente formati da 10 a 100 molecole di amminoacidi attraverso la condensazione di disidratazione sono chiamati polipeptidi.

I servizi personalizzati sui peptidi si riferiscono alla sintesi di peptidi in base ai requisiti del cliente, come sequenza, purezza, peso molecolare e contenuto di sale, per soddisfare esigenze specifiche. Il peso molecolare è confermato mediante spettrometria di massa per garantire la correttezza della MS grezza, seguita da purificazione utilizzando un sistema di cromatografia liquida ad alte prestazioni, quindi concentrazione e liofilizzazione per ottenere la polvere peptidica fine.

Per ottenere peptidi con sequenze aminoacidiche specifiche, utilizziamo il metodo Fmoc-SPPS (sintesi peptidica in fase solida). Durante la sintesi in fase solida, sul supporto in fase solida viene introdotto un gruppo capace di reagire con gruppi carbossilici per reagire con l'ammino protetto, ancorando il primo amminoacido alla resina. La reazione viene quindi completata dall'estremità C all'estremità N per completare la sintesi della sequenza peptidica target.

Metodi di purificazione:

La nostra azienda utilizza un sistema di cromatografia liquida ad alte prestazioni con una colonna preparatoria C18 inversa per la separazione e purificazione, seguendo questi passaggi:

Identificazione:Prendere una piccola quantità di peptide grezzo per la spettrometria di massa per confermare la presenza del peptide bersaglio (se sì, confermare il tempo di ritenzione nella colonna C18 mediante cromatografia analitica; in caso negativo, sintetizzare nuovamente il peptide grezzo).

Scioglimento:Utilizzare l'assistenza ultrasonica per la dissoluzione, selezionando in genere il 90% di acqua + il 10% di acetonitrile (metanolo o isopropanolo). Per una solubilità difficile, aggiungere acido acetico o acido trifluoroacetico appropriato per facilitare la dissoluzione se la sequenza ha una proporzione maggiore di amminoacidi basici; aggiungere acqua ammoniacale adeguata se predominano gli amminoacidi acidi. Utilizzare DMSO (dimetilsolfossido) se predominano gli aminoacidi idrofobici.

Filtrazione:Filtrare il prodotto grezzo disciolto attraverso una membrana filtrante da 0.45 µm (per proteggere la colonna preparatoria) per un uso successivo.

Caricamento del campione:Utilizzare il sistema preparatorio liquido ad alte prestazioni per immettere il campione liquido nella colonna preparatoria.

Eluizione:In base al gradiente di eluizione determinato nel passaggio 1), separare le impurità dai peptidi utilizzando le differenze di polarità dei peptidi di lunghezza variabile.

Vantaggi dell'utilizzo di un sistema di cromatografia liquida ad alte prestazioni:

Risoluzione più elevata rispetto ad altri metodi cromatografici; la colonna preparatoria C18 utilizzata ha un'elevata efficienza della colonna, una lunga durata e una buona riproducibilità, consentendo un uso ripetuto; alta velocità ed alta efficienza, con ogni campione purificato in pochi minuti o decine di minuti; ampia applicazione e tecnologia matura della cromatografia in fase inversa, che offre una buona selettività per vari tipi di composti organici.

Purificazione e liofilizzazione del peptide grezzo:

Il peptide grezzo viene separato e purificato utilizzando un sistema preparatorio per cromatografia liquida ad alte prestazioni e analizzato per la purezza utilizzando un cromatografo liquido ad alte prestazioni (HPLC) per ottenere i componenti liquidi qualificati.

Sistema di evaporazione rotante: il componente liquido qualificato viene sottoposto a riscaldamento sotto vuoto per rimuovere solventi organici facilmente volatili, ottenendo infine una soluzione contenente il peptide target, che viene poi posta in un congelatore per formare cristalli di ghiaccio solidi.

Sistema di liofilizzazione: i contenitori contenenti i cristalli di ghiaccio solidi vengono posizionati sul vassoio del liofilizzatore o sulla porta del vuoto. In un ambiente sotto vuoto, il prodotto peptidico viene sublimato, producendo infine polvere peptidica solida.

I cristalli peptidici sono pronti per la liofilizzazione nel liofilizzatore.