ペプチド精製

特定のアミノ酸配列を持つペプチドを得るためには、Fmoc-SPPS（固体位相ペプチド合成）法を使用します。

背景:

ペプチドは、生物体における様々な細胞機能に関連する生体活性物質です。その分子構造はアミノ酸とタンパク質の間に位置し、特定の順序で配置された複数のアミノ酸がペプチド結合（—NH—CO—）によって連結されています。2つのアミノ酸分子が脱水縮合して生成される化合物はジペプチドと呼ばれ、同様にトリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチドなどがあり、最大でノナペプチドまであります。通常、10から100個のアミノ酸分子が脱水縮合して生成される化合物はポリペプチドと呼ばれます。

ペプチドカスタムサービスとは、顧客の要件に基づいてペプチドを合成することを指します。例えば、配列、純度、分子量、塩含量などに基づき、特定のニーズに対応します。分子量は質量分析法で確認され、粗製MSの正確性が確保された後、高性能液体クロマトグラフィーシステムを使用して精製し、その後濃縮および凍結乾燥を行い、高品質なペプチド粉末が得られます。

特定のアミノ酸配列を持つペプチドを得るためには、Fmoc-SPPS（固体位相ペプチド合成）法を使用します。固体位相合成中、カルボン酸基と反応できるグループが固体担体に導入され、アミノ保護されたアミノ基と反応して最初のアミノ酸をレジンに固定します。その後、C末端からN末端へと反応を進めることで、目的のペプチド配列の合成が完了します。

精製方法:

当社は、分離および精製のために逆相C18準備カラムを備えた高性能液体クロマトグラフィーシステムを使用しており、以下の手順に従います：

識別： 粗ペプチドの少量を取り出し、質量分析法で目的のペプチドが存在することを確認します（存在する場合、解析用クロマトグラフィーを通じてC18カラムでの保留時間を確認します。存在しない場合は、粗ペプチドを再合成します）。

溶解： 超音波を用いて溶解を補助します。通常は90%水 + 10%アセトニトリル（メタノールまたはイソプロパノール）を選択します。溶解が難しい場合は、配列に多くの塩基性アミノ酸がある場合、酢酸または三氟酢酸を適量加えて溶解を助けます。酸性アミノ酸が多い場合は、適量のアンモニア水を加えます。疎水性アミノ酸が多い場合は、DMSO（ジメチルスルホキシド）を使用します。

濾過： 溶解した粗製品を0.45 µmのフィルターメンブレーンを通して（準備カラムを保護するために）、後ほど使用します。

サンプルの充填： 高性能液体準備システムを使用して、液体試料を準備カラムに導入します。

洗脱： ステップ1) で決定した洗脱勾配に基づき、異なる長さのペプチドの極性の違いを利用して、不純物をペプチドから分離します。

高性能液体クロマトグラフィーシステムを使用する利点：

他のクロマトグラフィー法よりも高い分解能；使用されるC18準備カラムは、高いカラム効率、長い耐用年数、良好な再現性を持ち、繰り返し使用が可能です；高速かつ高効率で、各サンプルは数分または十数分以内に純化されます；逆相クロマトグラフィーの幅広い応用と成熟した技術により、様々な種類の有機化合物に対して優れた選択性を提供します。

粗ペプチドの純化およびリヨードライズ：

粗ペプチドは高性能液体クロマトグラフィーの準備システムを使用して分離・精製され、高純度液体クロマトグラフ（HPLC）を使用して純度が分析され、合格した液状成分が得られます。

回転蒸発装置：合格した液状成分は減圧加熱により揮発性の有機溶媒が除去され、最終的に目的のペプチドを含む溶液が得られ、その後冷凍庫で固体の氷晶に形成されます。

凍結乾燥装置：固体の氷晶を入れた容器は凍結乾燥機のトレイまたは真空ポートに配置され、真空環境下でペプチド製品が昇華され、最終的に固体のペプチド粉末が得られます。

ペプチド結晶は凍結乾燥機での凍結乾燥処理の準備が整っています。