ペプチド精製 日本

特定のアミノ酸配列を持つペプチドを取得するために、Fmoc-SPPS（固相ペプチド合成）法を利用します。

背景：

ペプチドは、生物のさまざまな細胞機能に関わる生理活性物質です。それらの分子構造はアミノ酸とタンパク質の間にあり、特定の順序で配置され、ペプチド結合 (-NH-CO-) によって結合された複数のアミノ酸から構成されます。アミノ酸２分子が脱水縮合してできる化合物をジペプチドといい、同様にトリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチドなどからノナペプチドまであります。通常、10～100個のアミノ酸分子から脱水縮合して作られる化合物をポリペプチドと呼びます。

ペプチドカスタムサービスとは、特定のニーズを満たすために、配列、純度、分子量、塩含有量などの顧客の要件に基づいてペプチドを合成することを指します。粗MSの正確性を確保するために質量分析法で分子量を確認し、高速液体クロマトグラフィーシステムで精製し、濃縮、凍結乾燥してペプチド微粉末を取得します。

特定のアミノ酸配列をもつペプチドを得るには、Fmoc-SPPS（固相ペプチド合成）法を利用します。固相合成中、カルボキシル基と反応できる基が固相担体上に導入され、アミノ保護されたアミノと反応し、最初のアミノ酸が樹脂に固定されます。その後、C 末端から N 末端まで反応が完了し、標的ペプチド配列の合成が完了します。

精製方法:

当社では、分離と精製のために逆方向 C18 分取カラムを備えた高速液体クロマトグラフィー システムを次の手順で利用しています。

識別：質量分析用に少量の粗ペプチドを採取し、目的のペプチドの存在を確認します（存在する場合、分析クロマトグラフィーを通じて C18 カラムでの保持時間を確認します。存在しない場合、粗ペプチドを再合成します）。

解散：溶解には超音波を使用し、通常は 90% 水 + 10% アセトニトリル (メタノールまたはイソプロパノール) を選択します。溶解が難しい場合、配列に塩基性アミノ酸の割合が高い場合は、適切な酢酸またはトリフルオロ酢酸を加えて溶解を助けます。酸性アミノ酸が優勢な場合は、適切なアンモニア水を加えてください。疎水性アミノ酸が優勢な場合は、DMSO (ジメチルスルホキシド) を使用してください。

ろ過：溶解した粗生成物を、後で使用するために (分取カラムを保護するため) 0.45 μm フィルター膜で濾過します。

サンプルのロード:高性能液体分取システムを使用して、液体サンプルを分取カラムに注入します。

溶出:ステップ 1) で決定した溶出勾配に基づいて、さまざまな長さのペプチドの極性の違いを使用してペプチドから不純物を分離します。

高速液体クロマトグラフィー システムを使用する利点:

他のクロマトグラフィー法よりも高い分解能。使用される C18 分取カラムは、カラム効率が高く、耐用年数が長く、再現性が良いため、繰り返し使用できます。高速かつ高効率で、各サンプルは数分から数十分以内に精製されます。逆相クロマトグラフィーの幅広い用途と成熟した技術により、さまざまな種類の有機化合物に対して良好な選択性が得られます。

粗ペプチドの精製と凍結乾燥:

粗ペプチドは、高速液体クロマトグラフィー分取システムを使用して分離および精製され、高速液体クロマトグラフ (HPLC) を使用して純度が分析され、適格な液体成分が得られます。

ロータリーエバポレーションシステム: 適格な液体成分を真空加熱して揮発しやすい有機溶媒を除去し、最終的に目的のペプチドを含む溶液を得ます。これを冷凍庫に入れて固体の氷の結晶を形成します。

凍結乾燥システム: 固体の氷の結晶を入れた容器を凍結乾燥機のトレイまたは真空ポートに置きます。真空環境では、ペプチド生成物が昇華し、最終的に固体のペプチド粉末が得られます。

ペプチド結晶は、凍結乾燥機で凍結乾燥する準備ができています。