Peptidezuivering Nederland

Om peptiden met specifieke aminozuursequenties te verkrijgen, gebruiken we de Fmoc-SPPS-methode (vaste fase peptidesynthese).

Achtergrond:

Peptiden zijn bioactieve stoffen die verband houden met verschillende cellulaire functies in biologische organismen. Hun moleculaire structuur ligt tussen aminozuren en eiwitten in, bestaande uit meerdere aminozuren die in een specifieke volgorde zijn gerangschikt en met elkaar zijn verbonden door peptidebindingen (—NH—CO—). Verbindingen gevormd door de dehydratatiecondensatie van twee aminozuurmoleculen worden dipeptiden genoemd. Op dezelfde manier zijn er tripeptiden, tetrapeptiden, pentapeptiden, enzovoort, tot aan nonapeptiden. Verbindingen die doorgaans door dehydratatiecondensatie uit 10 tot 100 aminozuurmoleculen worden gemaakt, worden polypeptiden genoemd.

Op maat gemaakte peptidediensten hebben betrekking op de synthese van peptiden op basis van klantvereisten, zoals sequentie, zuiverheid, molecuulgewicht en zoutgehalte, om aan specifieke behoeften te voldoen. Het molecuulgewicht wordt bevestigd door middel van massaspectrometrie om de juistheid van het ruwe MS te garanderen, gevolgd door zuivering met behulp van een krachtig vloeistofchromatografiesysteem, vervolgens concentratie en lyofilisatie om het fijne peptidepoeder te verkrijgen.

Om peptiden met specifieke aminozuursequenties te verkrijgen, gebruiken we de Fmoc-SPPS-methode (vaste fase peptidesynthese). Tijdens de synthese in de vaste fase wordt een groep die in staat is te reageren met carboxylgroepen geïntroduceerd op de drager in de vaste fase om te reageren met het amino-beschermde amino, waardoor het eerste aminozuur aan de hars wordt verankerd. De reactie wordt vervolgens voltooid vanaf het C-uiteinde tot het N-uiteinde om de synthese van de doelpeptidesequentie te voltooien.

Zuiveringsmethoden:

Ons bedrijf maakt gebruik van een hoogwaardig vloeistofchromatografiesysteem met een omgekeerde C18-voorbereidingskolom voor scheiding en zuivering, waarbij de volgende stappen worden gevolgd:

Identificatie:Neem een ​​kleine hoeveelheid ruw peptide voor massaspectrometrie om de aanwezigheid van het doelpeptide te bevestigen (zo ja, bevestig de retentietijd ervan in de C18-kolom door middel van analytische chromatografie; zo nee, synthetiseer het ruwe peptide opnieuw).

Ontbinding:Gebruik ultrasone hulp voor het oplossen, waarbij u doorgaans 90% water + 10% acetonitril (methanol of isopropanol) selecteert. Voeg voor moeilijke oplosbaarheid geschikt azijnzuur of trifluorazijnzuur toe om het oplossen te vergemakkelijken als de sequentie een groter aandeel basische aminozuren bevat; voeg geschikt ammoniakwater toe als zure aminozuren overheersen. Gebruik DMSO (dimethylsulfoxide) als hydrofobe aminozuren de overhand hebben.

Filtratie:Filtreer het opgeloste ruwe product door een filtermembraan van 0.45 µm (ter bescherming van de voorbereidende kolom) voor later gebruik.

Voorbeeld laden:Gebruik het krachtige vloeistofvoorbereidingssysteem om het vloeistofmonster in de voorbereidingskolom in te voeren.

Elutie:Gebaseerd op de elutiegradiënt bepaald in stap 1), scheidt u de onzuiverheden van peptiden met behulp van de polariteitsverschillen van peptiden met verschillende lengtes.

Voordelen van het gebruik van een krachtig vloeistofchromatografiesysteem:

Hogere resolutie dan andere chromatografiemethoden; de gebruikte C18-voorbereidingskolom heeft een hoge kolomefficiëntie, een lange levensduur en een goede reproduceerbaarheid, waardoor herhaald gebruik mogelijk is; hoge snelheid en hoge efficiëntie, waarbij elk monster binnen enkele minuten of tientallen minuten wordt gezuiverd; brede toepassing en volwassen technologie van omgekeerde fasechromatografie, die een goede selectiviteit biedt voor verschillende soorten organische verbindingen.

Zuivering en lyofilisatie van ruwe peptiden:

Het ruwe peptide wordt gescheiden en gezuiverd met behulp van een hoogwaardig voorbereidingssysteem voor vloeistofchromatografie en op zuiverheid geanalyseerd met behulp van een krachtige vloeistofchromatograaf (HPLC) om de gekwalificeerde vloeibare componenten te verkrijgen.

Roterend verdampingssysteem: De gekwalificeerde vloeibare component wordt onderworpen aan vacuümverwarming om gemakkelijk vluchtige organische oplosmiddelen te verwijderen, waardoor uiteindelijk een oplossing wordt verkregen die het doelpeptide bevat, dat vervolgens in een vriezer wordt geplaatst om vaste ijskristallen te vormen.

Vriesdroogsysteem: Containers met de vaste ijskristallen worden op de vriesdrogerlade of vacuümpoort geplaatst. In een vacuümomgeving wordt het peptideproduct gesublimeerd, wat uiteindelijk vast peptidepoeder oplevert.

De peptidekristallen zijn klaar voor vriesdrogen in de vriesdroger.