Peptidrensing Norge

For å få peptider med spesifikke aminosyresekvenser bruker vi Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis) metoden.

Bakgrunn:

Peptider er bioaktive stoffer relatert til ulike cellulære funksjoner i biologiske organismer. Deres molekylære struktur ligger mellom aminosyrer og proteiner, bestående av flere aminosyrer arrangert i en bestemt rekkefølge og koblet med peptidbindinger (—NH—CO—). Forbindelser dannet ved dehydreringskondensering av to aminosyremolekyler kalles dipeptider, på samme måte er det tripeptider, tetrapeptider, pentapeptider og så videre, opp til nonapeptider. Forbindelser som vanligvis er laget av 10 til 100 aminosyremolekyler gjennom dehydreringskondensering kalles polypeptider.

Tilpassede peptidtjenester refererer til syntese av peptider basert på kundekrav, som sekvens, renhet, molekylvekt og saltinnhold, for å møte spesifikke behov. Molekylvekten bekreftes ved massespektrometri for å sikre riktigheten av den rå MS, etterfulgt av rensing ved hjelp av et høyytelses væskekromatografisystem, deretter konsentrering og frysetørking for å oppnå det fine peptidpulveret.

For å få peptider med spesifikke aminosyresekvenser bruker vi Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis) metoden. Under fastfasesyntese introduseres en gruppe som er i stand til å reagere med karboksylgrupper på fastfasebæreren for å reagere med den aminobeskyttede aminoen, og forankre den første aminosyren til harpiksen. Reaksjonen fullføres deretter fra C-enden til N-enden for å fullføre målpeptidsekvenssyntesen.

Rensemetoder:

Vårt firma bruker et høyytelses væskekromatografisystem med en omvendt C18 forberedende kolonne for separasjon og rensing, ved å følge disse trinnene:

Identifikasjon:Ta en liten mengde råpeptid for massespektrometri for å bekrefte tilstedeværelsen av målpeptidet (hvis ja, bekreft retensjonstiden i C18-kolonnen gjennom analytisk kromatografi; hvis nei, resyntetiser råpeptidet).

Oppløsning:Bruk ultralydhjelp for oppløsning, velg vanligvis 90 % vann + 10 % acetonitril (metanol eller isopropanol). For vanskelig løselighet, tilsett passende eddiksyre eller trifluoreddiksyre for å hjelpe oppløsningen hvis sekvensen har en høyere andel basiske aminosyrer; tilsett passende ammoniakkvann hvis sure aminosyrer er dominerende. Bruk DMSO (dimetylsulfoksid) hvis hydrofobe aminosyrer er dominerende.

filtrering:Filtrer det oppløste råproduktet gjennom en 0.45 µm filtermembran (for å beskytte den forberedende kolonnen) for senere bruk.

Prøvelasting:Bruk det høyytelses væskeprepareringssystemet til å legge inn væskeprøven i den forberedende kolonnen.

Eluering:Basert på elueringsgradienten bestemt i trinn 1), separer urenhetene fra peptider ved å bruke polaritetsforskjellene til peptider med varierende lengde.

Fordeler med å bruke et høyytelses væskekromatografisystem:

Høyere oppløsning enn andre kromatografimetoder; C18-forberedende kolonne som brukes har høy kolonneeffektivitet, lang levetid og god reproduserbarhet, noe som muliggjør gjentatt bruk; høy hastighet og høy effektivitet, hvor hver prøve renses innen minutter eller titalls minutter; bred anvendelse og moden teknologi for omvendt-fase kromatografi, som tilbyr god selektivitet for ulike typer organiske forbindelser.

Rensing og lyofilisering av rå peptider:

Det urene peptidet separeres og renses ved hjelp av et høyytelses væskekromatografi forberedende system og analyseres for renhet ved bruk av en høyytelses væskekromatograf (HPLC) for å oppnå de kvalifiserte væskekomponentene.

Roterende fordampningssystem: Den kvalifiserte flytende komponenten utsettes for vakuumoppvarming for å fjerne lettflyktige organiske løsningsmidler, og oppnår til slutt en løsning som inneholder målpeptidet, som deretter plasseres i en fryser for å danne faste iskrystaller.

Frysetørkesystem: Beholdere som inneholder de faste iskrystallene plasseres på frysetørkebrettet eller vakuumporten. I et vakuummiljø sublimeres peptidproduktet, noe som til slutt gir fast peptidpulver.

Peptidkrystallene er klare for frysetørking i frysetørkeren.