Oczyszczanie peptydów Polska

Do otrzymania peptydów o określonej sekwencji aminokwasów wykorzystujemy metodę Fmoc-SPPS (synteza peptydów w fazie stałej).

Tło:

Peptydy to substancje bioaktywne związane z różnymi funkcjami komórkowymi w organizmach biologicznych. Ich struktura molekularna leży pomiędzy aminokwasami i białkami, składającymi się z wielu aminokwasów ułożonych w określonej kolejności i połączonych wiązaniami peptydowymi (-NH-CO-). Związki powstałe w wyniku kondensacji odwodnienia dwóch cząsteczek aminokwasów nazywane są dipeptydami, podobnie istnieją tripeptydy, tetrapeptydy, pentapeptydy i tak dalej, aż do nonapeptydów. Związki zwykle utworzone z 10 do 100 cząsteczek aminokwasów w wyniku kondensacji odwodnienia nazywane są polipeptydami.

Niestandardowe usługi peptydowe odnoszą się do syntezy peptydów w oparciu o wymagania klienta, takie jak sekwencja, czystość, masa cząsteczkowa i zawartość soli, w celu zaspokojenia określonych potrzeb. Masę cząsteczkową potwierdza się spektrometrią mas, aby zapewnić poprawność surowego MS, następnie oczyszcza się przy użyciu wysokosprawnego układu chromatografii cieczowej, następnie zatęża i liofilizuje w celu otrzymania drobnego proszku peptydowego.

Do otrzymania peptydów o określonej sekwencji aminokwasów wykorzystujemy metodę Fmoc-SPPS (synteza peptydów w fazie stałej). Podczas syntezy w fazie stałej na nośnik w fazie stałej wprowadza się grupę zdolną do reakcji z grupami karboksylowymi, która reaguje z grupą aminową zabezpieczoną grupą aminową, zakotwiczając pierwszy aminokwas w żywicy. Następnie reakcja zostaje zakończona od C-końca do N-końca, aby zakończyć syntezę docelowej sekwencji peptydowej.

Metody oczyszczania:

Nasza firma wykorzystuje wysokosprawny system chromatografii cieczowej z odwróconą kolumną przygotowawczą C18 do separacji i oczyszczania, wykonując następujące kroki:

Identyfikacja:Pobrać niewielką ilość surowego peptydu do spektrometrii mas, aby potwierdzić obecność docelowego peptydu (jeśli tak, potwierdzić jego czas retencji na kolumnie C18 za pomocą chromatografii analitycznej; jeśli nie, dokonać ponownej syntezy surowego peptydu).

Rozpuszczenie:Do rozpuszczania użyj pomocy ultradźwiękowej, zazwyczaj wybierając 90% wody + 10% acetonitrylu (metanol lub izopropanol). W przypadku trudnej rozpuszczalności dodać odpowiedni kwas octowy lub kwas trifluorooctowy, aby ułatwić rozpuszczenie, jeśli sekwencja ma wyższy udział zasadowych aminokwasów; dodać odpowiednią wodę amoniakalną, jeśli dominują aminokwasy kwasowe. Jeśli dominują aminokwasy hydrofobowe, użyj DMSO (sulfotlenek dimetylu).

Filtrowanie:Przesączyć rozpuszczony surowy produkt przez membranę filtracyjną 0.45 µm (w celu ochrony kolumny przygotowawczej) do późniejszego użycia.

Ładowanie próbki:Użyj wysokowydajnego systemu przygotowania cieczy, aby wprowadzić próbkę cieczy do kolumny przygotowawczej.

Elucja:W oparciu o gradient elucji określony w etapie 1) oddzielić zanieczyszczenia od peptydów, stosując różnicę polaryzacji peptydów o różnej długości.

Zalety stosowania systemu wysokosprawnej chromatografii cieczowej:

Wyższa rozdzielczość niż w przypadku innych metod chromatografii; zastosowana kolumna przygotowawcza C18 charakteryzuje się wysoką wydajnością kolumny, długą żywotnością i dobrą powtarzalnością, pozwalającą na wielokrotne użycie; duża szybkość i wysoka wydajność, przy czym każda próbka jest oczyszczana w ciągu kilku minut lub kilkudziesięciu minut; szerokie zastosowanie i dojrzała technologia chromatografii z odwróconą fazą, oferująca dobrą selektywność dla różnych typów związków organicznych.

Oczyszczanie i liofilizacja surowych peptydów:

Surowy peptyd oddziela się i oczyszcza przy użyciu układu przygotowawczego wysokosprawnej chromatografii cieczowej i analizuje pod kątem czystości przy użyciu wysokosprawnego chromatografu cieczowego (HPLC) w celu otrzymania kwalifikowanych składników ciekłych.

Obrotowy system odparowywania: Zakwalifikowany płynny składnik poddaje się ogrzewaniu próżniowemu w celu usunięcia łatwo lotnych rozpuszczalników organicznych, uzyskując ostatecznie roztwór zawierający docelowy peptyd, który następnie umieszcza się w zamrażarce w celu utworzenia stałych kryształków lodu.

System liofilizacji: Pojemniki zawierające stałe kryształki lodu umieszcza się na tacy liofilizatora lub porcie próżniowym. W środowisku próżniowym produkt peptydowy ulega sublimacji, ostatecznie otrzymując stały proszek peptydowy.

Kryształy peptydu są gotowe do liofilizacji w liofilizatorze.