Purificare Peptide

Pentru a obține peptide cu secvențe specifice de aminoaciți, utilizăm metoda Fmoc-SPPS (sinteza peptidică pe fază solidă).

În fond:

Peptizii sunt substanțe bioactice asociate cu diverse funcții celulare în organismele biologice. Structura lor moleculară se situează între aminoacizi și proteine, constând din mai multe aminoacizi aranjați într-un anumit ordine și legați prin legături peptidice (—NH—CO—). Compusul format prin condensarea prin dehidratare a două molecule de aminoacizi se numește dipeptid, similar există tripeptide, tetrapeptide, pentapeptide, și așa mai departe, până la nonapeptide. Compusii obișnuiți formați din 10 până la 100 molecule de aminoacizi prin condensarea prin dehidratare se numesc polipeptide.

Serviciile de peptide personalizate se referă la sinteza de peptide în funcție de cerințele clientului, cum ar fi secvența, pureța, greutatea moleculară și conținutul de sare, pentru a satisface nevoile specifice. Greutatea moleculară este confirmată prin spectrometrie de masă pentru a se asigura de corectitudinea MS crudei, urmată de purificare folosind un sistem de cromatografie lichidă cu performanță ridicată, apoi concentrare și liofilizare pentru a obține pudra de peptide fină.

Pentru a obține peptide cu secvențe specifice de aminoacizi, utilizăm metoda Fmoc-SPPS (sinteza pe fază solidă a peptideelor). În timpul sintezei pe fază solidă, pe porteurul de fază solidă se introduce un grup capabil să reacționeze cu grupurile carboxilice pentru a reacționa cu aminoacizii protejați la nivelul amin, ancorează primul aminoacid la resină. Reacția se finalizează de la extremitatea C spre extremitatea N pentru a completa sinteza secvenței de peptide țintă.

Metode de purificare:

Compania noastră utilizează un sistem de cromatografie lichidă cu performanță ridicată cu o coloană preparativă C18 inversată pentru separare și purificare, urmând aceste pași:

Identificare: Luați o cantitate mică de peptid brut pentru spectrometria de masă pentru a confirma prezența peptidului țintă (dacă da, confirmați timpul său de reținere în coloana C18 prin cromatografie analitică; dacă nu, resintetizați peptidul brut).

Dizolvare: Utilizați asistența ultrasonică pentru dizolvare, selectând de obicei 90% apă + 10% acetonitrilă (metanol sau izopropanol). Pentru dizolvabilitate dificilă, adăugați acetică sau trifluoroacetică corespunzătoare pentru a ajuta la dizolvare dacă secvența are o proporție mai mare de aminoacizi de bază; adăugați apa de amoniac corespunzătoare dacă aminoacizii acizi sunt predominanți. Utilizați DMSO (sulfoxid dimetilic) dacă aminoacizii hidrofobi sunt predominanți.

Filtrare: Filtrarea produsului brut dizolvat printr-o membrană filtrantă de 0,45 µm (pentru a proteja coloana preparativă) pentru utilizare ulterioară.

Încărcarea eșantionului: Folosiți sistemul de preparare lichidă cu performanță ridicată pentru a introduce eșantionul lichid în coloana preparativă.

Eluire: Pe baza gradientului de eluire determinat la pasul 1), separați impuritățile de peptide folosind diferențele de polaritate ale peptidilor de lungimi variate.

Avantajele utilizării unui sistem de cromatografie lichidă cu performanță ridicată:

Rezoluție mai mare decât metodele alternative de cromatografie; coloana preparativă C18 folosită are o eficiență de coloană ridicată, o viață utilă lungă și o bună reproductibilitate, permițând utilizarea repetată; viteză rapidă și eficiență ridicată, fiecare eșantion fiind purificat în câteva minute sau zeci de minute; aplicabilitate largă și tehnologie matură a cromatografiei pe fază inversă, oferind o selectivitate bună pentru diverse tipuri de compuși organici.

Purificare și liofilizare a peptidilor ruși:

Peptidul brut este separat și purificat folosind un sistem preparativ de cromatografie lichidă cu performanță ridicată și analizat pentru puretate folosind o cromatografie lichidă cu performanță ridicată (HPLC) pentru a obține componente liquide calificate.

Sistem de Evaporație Rotary: Componenta liquidă calificată este supusă încălzirii sub vacuu pentru a elimina solvenții organici volatili ușori, obținându-se în final o soluție care conține peptidul țintă, care este apoi plasată într-un congelator pentru a forma cristale de gheață solide.

Sistem de Liofilizare: Vasele care conțin cristalele de gheață solide sunt plasate pe farfuria sau portul de vacuu al liofilizorului. Într-un mediu de vacuu, produsul peptidic este sublimat, obținându-se în cele din urmă un pudră peptidică solidă.

Cristalele peptidice sunt gata pentru liofilizare în liofilizor.