Purificarea cu peptide România

Pentru a obține peptide cu secvențe specifice de aminoacizi, folosim metoda Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis).

Context:

Peptidele sunt substanțe bioactive legate de diferite funcții celulare în organismele biologice. Structura lor moleculară se află între aminoacizi și proteine, constând din mai mulți aminoacizi aranjați într-o anumită ordine și legați prin legături peptidice (—NH—CO—). Compușii formați prin condensarea prin deshidratare a două molecule de aminoacizi se numesc dipeptide, în mod similar, există tripeptide, tetrapeptide, pentapeptide și așa mai departe, până la nonapeptide. Compușii obținuți în mod obișnuit de la 10 până la 100 de molecule de aminoacizi prin condensare prin deshidratare sunt numiți polipeptide.

Serviciile personalizate cu peptide se referă la sinteza de peptide pe baza cerințelor clienților, cum ar fi secvența, puritatea, greutatea moleculară și conținutul de sare, pentru a satisface nevoile specifice. Greutatea moleculară este confirmată prin spectrometrie de masă pentru a asigura corectitudinea MS brută, urmată de purificare folosind un sistem de cromatografie lichidă de înaltă performanță, apoi concentrare și liofilizare pentru a obține pulberea fină de peptidă.

Pentru a obține peptide cu secvențe specifice de aminoacizi, folosim metoda Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis). În timpul sintezei în fază solidă, pe purtătorul în fază solidă este introdusă o grupare capabilă să reacţioneze cu grupări carboxilice pentru a reacţiona cu amino protejat cu amino, ancorând primul aminoacid la răşină. Reacția este apoi finalizată de la capătul C la capătul N pentru a finaliza sinteza secvenței peptidei țintă.

Metode de purificare:

Compania noastră utilizează un sistem de cromatografie lichidă de înaltă performanță cu o coloană pregătitoare inversă C18 pentru separare și purificare, urmând acești pași:

Identificare:Luați o cantitate mică de peptidă brută pentru spectrometria de masă pentru a confirma prezența peptidei țintă (dacă da, confirmați timpul de retenție al acesteia în coloana C18 prin cromatografie analitică; dacă nu, resintetizați peptida brută).

Dizolvare:Utilizați asistență ultrasonică pentru dizolvare, selectând de obicei 90% apă + 10% acetonitril (metanol sau izopropanol). Pentru o solubilitate dificilă, adăugați acid acetic sau acid trifluoracetic adecvat pentru a ajuta dizolvarea dacă secvența are o proporție mai mare de aminoacizi bazici; adăugați apă cu amoniac adecvată dacă predomină aminoacizii acizi. Utilizați DMSO (dimetil sulfoxid) dacă predomină aminoacizii hidrofobi.

Filtrare:Se filtrează produsul brut dizolvat printr-o membrană de filtru de 0.45 µm (pentru a proteja coloana pregătitoare) pentru utilizare ulterioară.

Încărcare eșantion:Utilizați sistemul de pregătire lichid de înaltă performanță pentru a introduce proba lichidă în coloana pregătitoare.

elutie:Pe baza gradientului de eluție determinat în pasul 1), separați impuritățile de peptide folosind diferențele de polaritate ale peptidelor de lungime variabilă.

Avantajele utilizării unui sistem de cromatografie lichidă de înaltă performanță:

Rezoluție mai mare decât alte metode de cromatografie; coloana pregătitoare C18 utilizată are o eficiență ridicată a coloanei, o durată de viață lungă și o reproductibilitate bună, permițând utilizarea repetată; viteză rapidă și eficiență ridicată, fiecare probă fiind purificată în câteva minute sau zeci de minute; aplicare largă și tehnologie matură a cromatografiei în fază inversă, oferind o bună selectivitate pentru diferite tipuri de compuși organici.

Purificarea și liofilizarea cu peptidă brută:

Peptida brută este separată și purificată folosind un sistem pregătitor de cromatografie lichidă de înaltă performanță și analizată pentru puritate folosind un cromatograf lichid de înaltă performanță (HPLC) pentru a obține componentele lichide calificate.

Sistem de evaporare rotativă: Componenta lichidă calificată este supusă încălzirii în vid pentru a îndepărta solvenții organici ușor volatili, obținându-se în final o soluție care conține peptida țintă, care este apoi plasată într-un congelator pentru a forma cristale solide de gheață.

Sistem de uscare prin congelare: Recipientele care conțin cristalele solide de gheață sunt plasate pe tava de liofilizare sau portul de vid. Într-un mediu de vid, produsul peptidic este sublimat, rezultând în cele din urmă pulbere solidă de peptidă.

Cristalele de peptide sunt gata pentru uscare prin congelare în liofilizare.