Очистка пептидов Россия

Для получения пептидов со специфическими аминокислотными последовательностями мы используем метод Fmoc-SPPS (твердофазный синтез пептидов).

Задний план:

Пептиды — это биологически активные вещества, связанные с различными клеточными функциями биологических организмов. Их молекулярная структура находится между аминокислотами и белками и состоит из множества аминокислот, расположенных в определенном порядке и связанных пептидными связями (—NH—CO—). Соединения, образующиеся в результате дегидратационной конденсации двух молекул аминокислот, называются дипептидами, аналогично существуют трипептиды, тетрапептиды, пентапептиды и так далее, вплоть до нонапептидов. Соединения, обычно состоящие из 10–100 молекул аминокислот путем дегидратационной конденсации, называются полипептидами.

Услуги по индивидуальному заказу пептидов относятся к синтезу пептидов на основе требований клиента, таких как последовательность, чистота, молекулярная масса и содержание соли, для удовлетворения конкретных потребностей. Молекулярную массу подтверждают масс-спектрометрией для обеспечения правильности неочищенного МС с последующей очисткой с использованием системы высокоэффективной жидкостной хроматографии, затем концентрированием и лиофилизацией для получения мелкодисперсного пептидного порошка.

Для получения пептидов со специфическими аминокислотными последовательностями мы используем метод Fmoc-SPPS (твердофазный синтез пептидов). Во время твердофазного синтеза на твердофазный носитель вводят группу, способную реагировать с карбоксильными группами, для взаимодействия с аминозащищенной аминогруппой, закрепляя первую аминокислоту на смоле. Затем реакция завершается от C-конца к N-концу для завершения синтеза целевой пептидной последовательности.

Методы очистки:

Наша компания использует высокоэффективную систему жидкостной хроматографии с обратной подготовительной колонкой C18 для разделения и очистки, соблюдая следующие этапы:

Идентификация:Возьмите небольшое количество сырого пептида для масс-спектрометрии, чтобы подтвердить наличие целевого пептида (если да, подтвердите время его удерживания в колонке C18 с помощью аналитической хроматографии; если нет, повторите синтез сырого пептида).

Растворение:Используйте ультразвуковую помощь для растворения, обычно выбирая 90% воды + 10% ацетонитрила (метанол или изопропанол). В случае затрудненной растворимости добавьте соответствующую уксусную кислоту или трифторуксусную кислоту, чтобы облегчить растворение, если последовательность содержит более высокую долю основных аминокислот; добавьте соответствующую аммиачную воду, если преобладают кислые аминокислоты. Используйте ДМСО (диметилсульфоксид), если преобладают гидрофобные аминокислоты.

Фильтрация:Отфильтруйте растворенный сырой продукт через мембранный фильтр 0.45 мкм (для защиты подготовительной колонки) для последующего использования.

Загрузка образца:Используйте высокопроизводительную систему подготовки жидкости для ввода пробы жидкости в подготовительную колонку.

Элюирование:На основании градиента элюирования, определенного на этапе 1), отделите примеси от пептидов, используя различия в полярности пептидов различной длины.

Преимущества использования системы высокоэффективной жидкостной хроматографии:

Более высокое разрешение, чем у других методов хроматографии; используемая подготовительная колонка C18 имеет высокую эффективность колонки, длительный срок службы и хорошую воспроизводимость, что позволяет многократно использовать ее; быстрая скорость и высокая эффективность: очистка каждой пробы занимает от нескольких минут до десятков минут; широкое применение и развитая технология обращенно-фазовой хроматографии, обеспечивающая хорошую селективность к различным типам органических соединений.

Очистка и лиофилизация сырых пептидов:

Неочищенный пептид отделяют и очищают с использованием подготовительной системы для высокоэффективной жидкостной хроматографии и анализируют на чистоту с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для получения соответствующих жидких компонентов.

Роторная система испарения. Соответствующий жидкий компонент подвергается вакуумному нагреву для удаления легколетучих органических растворителей, в результате чего получается раствор, содержащий целевой пептид, который затем помещается в морозильную камеру для образования твердых кристаллов льда.

Система сублимационной сушки: Контейнеры, содержащие твердые кристаллы льда, помещаются на лоток сублимационной сушки или вакуумный порт. В вакууме пептидный продукт сублимируется, в конечном итоге образуя твердый пептидный порошок.

Кристаллы пептида готовы к сублимационной сушке в сублимационной сушилке.