Čišćenje peptida

Da bismo dobili peptidi sa specifičnim nizovima aminokiselina, koristimo Fmoc-SPPS metodu (solid-fazna sinteza peptida).

Pozadinske informacije:

Peptidi su bioaktivne tvari povezane sa raznim celijaskim funkcijama u bioloskim organizmima. Njihova molekularna struktura nalazi se između aminokiselina i proteina, sastoji se od više aminokiselina raspoređenih u određenom redosledu i povezanih peptidskim vezbama (—NH—CO—). Složenine formirane dehidracijskom kondenzacijom dve aminokiselinske molekule nazivaju se dipeptidi, slično tome postoje tripeptidi, tetrapeptidi, pentapeptidi, itd., do nonapeptida. Složenine obično formirane od 10 do 100 aminokiselinskih molekula kroz dehidracijsku kondenzaciju nazivaju se polipeptidi.

Usluge prilagođenih peptida se odnose na sintezu peptida prema zahtevima kupca, kao što su niz, čistoća, molekularna težina i sadržaj soli, kako bi se ispunile specifične potrebe. Molekularna težina se potvrđuje masovnom spektrometrijom da bi se osigurala tačnost primitivnog MS-a, zatim se vrši očišćavanje pomoću sistema visokoproduktivne tekuće hromatografije, koncentracija i liofilizacija kako bi se dobila fina peptidska prašina.

Kako bismo dobili peptide sa specifičnim nizovima aminokiselina, koristimo metodu Fmoc-SPPS (solid-fazna sinteza peptida). Tijekom solid-faznog sintetičkog procesa, na solid-fazni nosač se uvodi grupa koja može reagovati s kiselinim grupama kako bi se reagovala sa zaštićenim aminom, čime se prva aminokiselina zakorijeni na rezinu. Reakcija se zatim izvodi od C-kraja do N-kraja kako bi se dovršila sinteza ciljnog peptidskog niza.

Metode očišćavanja:

Naša kompanija koristi sistem visokoproduktivne tečne kromatografije sa obrnutim C18 pripremnim kolonom za odvajanje i čišćenje, prateći ove korake:

identifikacija: Uzmite malu količinu neobradjenog peptida za masensku spektroskopiju kako biste potvrdili prisustvo ciljnog peptida (ako jeste, potvrdite njegovo vreme zadržavanja u C18 kolonu preko analitičke kromatografije; ako nije, ponovo sintetizujte neobradjeni peptid).

Dizolvanje: Koristite ultrazvučno pomoć za dizolvanje, obično izabrali 90% vode + 10% acetonitrila (metanol ili izopropanol). U slučaju teškog dizolvanja, dodajte odgovarajuće količine octe ili trifluorocte da pomognete u dizolvanju ako niz ima veći udio osnovnih aminokiselina; dodajte odgovarajuće količine vode s amonijom ako su kiseline aminokiseline dominantne. Koristite DMSO (dimetilsulfoksid) ako su hidrofobne aminokiseline dominantne.

Филтрирање: Filtrirajte dizolvani neobradjeni proizvod kroz membrański filter od 0.45 µm (da se zaštiti pripremni kolon) za kasnije korišćenje.

Učitavanje uzorka: Koristite visoko-performansni tečno-fazni pripremni sistem za unos tečnog uzorka u pripremnu kolonu.

Eluciranje: Na osnovu eluciranja gradijenta određenog u koraku 1), odvojite omete od peptida korišćenjem polaritetskih razlika peptida različite dužine.

Prednosti korišćenja sistema visoko-performansne tečno-fazne hromatografije:

Viša rezolucija nego što je kod drugih metoda hromatografije; C18 pripremna kolona koja se koristi ima visoku efikasnost kolone, dug životni vek i dobru reprodukciju, omogućavajući ponovnu upotrebu; brzina i efikasnost, sa svakim uzorkom koji se očišćava u minutima ili desetinama minuta; široko primenljivost i zrelo tehnologije obrnuto-fazne hromatografije, pružajući dobru selektivnost za različite vrste organskih spojeva.

Očišćavanje i liofilizacija krudnih peptida:

Rudna peptidska smjesa se odvaja i očišćava pomoću sistema visokoprinosne tekuće kromatografije, a analizira se po čistoći koristeći visokoprinosnu tekuću kromatografiju (HPLC) kako bi se dobile kvalificirane tekuće sastojke.

Rotacioni evaporator: Kvalificirani tekući sastojak se podvrgava vakuumsku topljenju kako bi se uklonili lako volatilni organski razjačivači, nakon čega se dobija rješenje koje sadrži ciljni peptid, koje se zatim stavlja u hladnjak da bi se formirale čvrste ledeno kristale.

Sistem za ledeno sušenje: Spremnici sa čvrstim ledenim kristalima postavljaju se na ploču ili vakuumski otvor sušila za ledeno sušenje. U vakuumskom okruženju, peptidski proizvod se sublimira, što konačno daje čvrsti peptidski prah.

Peptidske kristale je spremno za ledeno sušenje u sušilu za ledeno sušenje.