Пептиде Пурифицатион Србија

Да бисмо добили пептиде са специфичним секвенцама аминокиселина, користимо метод Фмоц-СППС (солид-пхасе пептиде синтхесис).

бацкгроунд:

Пептиди су биоактивне супстанце које се односе на различите ћелијске функције у биолошким организмима. Њихова молекуларна структура лежи између аминокиселина и протеина, а састоји се од више аминокиселина распоређених у одређеном редоследу и повезаних пептидним везама (—НХ—ЦО—). Једињења настала дехидрацијском кондензацијом два молекула аминокиселина називају се дипептиди, сходно томе постоје трипептиди, тетрапептиди, пентапептиди и тако даље, до нонапептида. Једињења која се обично праве од 10 до 100 молекула аминокиселина кондензацијом дехидратације називају се полипептиди.

Прилагођене услуге пептида односе се на синтезу пептида на основу захтева купаца, као што су секвенца, чистоћа, молекулска тежина и садржај соли, како би се задовољиле специфичне потребе. Молекуларна тежина је потврђена масеном спектрометријом да би се осигурала исправност сировог МС, након чега следи пречишћавање коришћењем система течне хроматографије високих перформанси, затим концентрација и лиофилизација да би се добио фини пептидни прах.

Да бисмо добили пептиде са специфичним секвенцама аминокиселина, користимо методу Фмоц-СППС (солид-пхасе пептиде синтхесис). Током синтезе у чврстој фази, група која је способна да реагује са карбоксилним групама се уводи на носач чврсте фазе да реагује са амино заштићеним аминокиселином, учвршћујући прву амино киселину за смолу. Реакција се затим завршава од Ц-краја до Н-краја да би се завршила синтеза циљне пептидне секвенце.

Методе пречишћавања:

Наша компанија користи систем течне хроматографије високих перформанси са обрнутом Ц18 припремном колоном за одвајање и пречишћавање, пратећи ове кораке:

Идентификација:Узмите малу количину сировог пептида за масену спектрометрију да бисте потврдили присуство циљног пептида (ако јесте, потврдите његово време задржавања у Ц18 колони аналитичком хроматографијом; ако не, поново синтетизујте сирови пептид).

Распуштање:Користите ултразвучну помоћ за растварање, обично бирајући 90% воде + 10% ацетонитрила (метанол или изопропанол). За тешку растворљивост, додајте одговарајућу сирћетну киселину или трифлуоросирћетну киселину да би се олакшало растварање ако секвенца има већи удео базних амино киселина; додати одговарајућу амонијачну воду ако преовлађују киселе аминокиселине. Користите ДМСО (диметил сулфоксид) ако су хидрофобне аминокиселине преовлађујуће.

Филтрирање:Филтрирати растворени сирови производ кроз 0.45 µм филтер мембрану (да заштити припремну колону) за каснију употребу.

Учитавање узорка:Користите течни припремни систем високих перформанси да унесете течни узорак у припремну колону.

елуција:На основу градијента елуирања одређеног у кораку 1), одвојите нечистоће од пептида користећи разлике поларитета пептида различите дужине.

Предности коришћења система течне хроматографије високих перформанси:

Већа резолуција од других метода хроматографије; коришћена припремна колона Ц18 има високу ефикасност колоне, дуг радни век и добру поновљивост, што омогућава поновну употребу; велика брзина и висока ефикасност, при чему се сваки узорак пречишћава у року од неколико минута или десетина минута; широка примена и зрела технологија хроматографије реверзне фазе, која нуди добру селективност за различите врсте органских једињења.

Пречишћавање и лиофилизација сирових пептида:

Сирови пептид је одвојен и пречишћен коришћењем припремног система за течну хроматографију високих перформанси и анализиран на чистоћу коришћењем течног хроматографа високих перформанси (ХПЛЦ) да би се добиле квалификоване течне компоненте.

Ротациони систем за испаравање: Квалификована течна компонента се подвргава загревању у вакууму да би се уклонили лако испарљиви органски растварачи, да би се коначно добио раствор који садржи циљни пептид, који се затим ставља у замрзивач да би се формирали чврсти кристали леда.

Систем за сушење замрзавањем: Контејнери који држе чврсте кристале леда постављају се на послужавник за сушење замрзавањем или на вакуум порт. У вакуумском окружењу, пептидни производ се сублимира, дајући на крају чврсти пептидни прах.

Пептидни кристали су спремни за сушење замрзавањем у сушачу.