För att få peptider med specifika aminosyrasekvenser använder vi metoden Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis). Bakgrund: Peptider är bioaktiva substanser relaterade till olika cellulära funktioner i biologiska organismer. Deras mol...
DelaFör att få peptider med specifika aminosyrasekvenser använder vi metoden Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis).
Bakgrund:
Peptider är bioaktiva ämnen relaterade till olika cellulära funktioner i biologiska organismer. Deras molekylära struktur ligger mellan aminosyror och proteiner, bestående av flera aminosyror ordnade i en specifik ordning och sammanlänkade med peptidbindningar (—NH—CO—). Föreningar som bildas genom dehydreringskondensering av två aminosyramolekyler kallas dipeptider, på samma sätt finns det tripeptider, tetrapeptider, pentapeptider och så vidare, upp till nonapeptider. Föreningar som vanligtvis tillverkas av 10 till 100 aminosyramolekyler genom dehydreringskondensering kallas polypeptider.
Anpassade peptidtjänster avser syntes av peptider baserat på kundkrav, såsom sekvens, renhet, molekylvikt och saltinnehåll, för att möta specifika behov. Molekylvikten bekräftas med masspektrometri för att säkerställa riktigheten av den råa MS, följt av rening med ett högpresterande vätskekromatografisystem, sedan koncentrering och lyofilisering för att erhålla det fina peptidpulvret.
För att få peptider med specifika aminosyrasekvenser använder vi metoden Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis). Under fastfassyntes introduceras en grupp som kan reagera med karboxylgrupper på fastfasbäraren för att reagera med den aminoskyddade aminon, förankrar den första aminosyran till hartset. Reaktionen fullbordas sedan från C-änden till N-änden för att fullborda målpeptidsekvenssyntesen.
Reningsmetoder:
Vårt företag använder ett högpresterande vätskekromatografisystem med en omvänd C18 förberedande kolonn för separation och rening, genom att följa dessa steg:
Identifiering:Ta en liten mängd rå peptid för masspektrometri för att bekräfta närvaron av målpeptiden (om ja, bekräfta dess retentionstid i C18-kolonnen genom analytisk kromatografi; om nej, syntetisera den råa peptiden om).
Upplösning:Använd ultraljudshjälp för upplösning, välj vanligtvis 90 % vatten + 10 % acetonitril (metanol eller isopropanol). För svårlöslighet, tillsätt lämplig ättiksyra eller trifluorättiksyra för att underlätta upplösningen om sekvensen har en högre andel basiska aminosyror; tillsätt lämpligt ammoniakvatten om sura aminosyror är dominerande. Använd DMSO (dimetylsulfoxid) om hydrofoba aminosyror är dominerande.
Filtrering:Filtrera den lösta råprodukten genom ett 0.45 µm filtermembran (för att skydda den förberedande kolonnen) för senare användning.
Provladdning:Använd det högpresterande vätskeförberedande systemet för att mata in vätskeprovet i den förberedande kolonnen.
Eluering:Baserat på elueringsgradienten som bestäms i steg 1), separera föroreningarna från peptider med hjälp av polaritetsskillnaderna för peptider med varierande längd.
Fördelar med att använda ett högpresterande vätskekromatografisystem:
Högre upplösning än andra kromatografimetoder; den använda C18 förberedande kolonnen har hög kolonneffektivitet, lång livslängd och god reproducerbarhet, vilket möjliggör upprepad användning; snabb hastighet och hög effektivitet, med varje prov som renas inom några minuter eller tiotals minuter; bred tillämpning och mogen teknologi för omvändfaskromatografi, som erbjuder god selektivitet för olika typer av organiska föreningar.
Rå peptidrening och lyofilisering:
Den råa peptiden separeras och renas med ett förberedande system för högpresterande vätskekromatografi och analyseras med avseende på renhet med användning av en högpresterande vätskekromatograf (HPLC) för att erhålla de kvalificerade vätskekomponenterna.
Roterande indunstningssystem: Den kvalificerade flytande komponenten utsätts för vakuumuppvärmning för att avlägsna lättflyktiga organiska lösningsmedel, och slutligen erhålls en lösning som innehåller målpeptiden, som sedan placeras i en frys för att bilda fasta iskristaller.
Frystorkningssystem: Behållare som innehåller de fasta iskristallerna placeras på frystorkarbrickan eller vakuumporten. I en vakuummiljö sublimeras peptidprodukten, vilket slutligen ger fast peptidpulver.
Peptidkristallerna är klara för frystorkning i frystorken.