การกรองเปปไทด์

เพื่อให้ได้เปปไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนเฉพาะ เราใช้วิธี Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis)

หลัง:

เพปไทด์เป็นสารชีวภาพที่เกี่ยวข้องกับฟังก์ชันเซลล์ต่าง ๆ ในสิ่งมีชีวิตโครงสร้างโมเลกุลของพวกมันอยู่ระหว่างกรดอะมิโนและโปรตีน โดยประกอบด้วยกรดอะมิโนหลายตัวเรียงตามลำดับเฉพาะและเชื่อมโยงกันด้วยพันธะเพปไทด์ (—NH—CO—) สารประกอบที่เกิดจากการควบแน่นโดยการระเหยน้ำของโมเลกุลกรดอะมิโนสองตัวเรียกว่าไดเพปไทด์ เช่นเดียวกันก็มีทรีเพปไทด์ เตตราเพปไทด์ เพนตาเพปไทด์ และอื่น ๆ จนถึงนอนาเพปไทด์ สารประกอบที่มักจะประกอบด้วยโมเลกุลกรดอะมิโน 10 ถึง 100 ตัวผ่านกระบวนการควบแน่นโดยการระเหยน้ำเรียกว่าโพลีเพปไทด์

บริการสังเคราะห์เปปไทด์ตามความต้องการของลูกค้าหมายถึงการสังเคราะห์เปปไทด์ตามข้อกำหนดของลูกค้า เช่น ลำดับเปปไทด์ ความบริสุทธิ์ น้ำหนักโมเลกุล และปริมาณเกลือ เพื่อตอบสนองความต้องการเฉพาะ โดยน้ำหนักโมเลกุลจะได้รับการยืนยันผ่านการวิเคราะห์ด้วยมวลสเปกโตรมิเตอร์เพื่อตรวจสอบความถูกต้องของ MS คร่าว ๆ จากนั้นจึงทำการฟอกด้วยระบบโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง แล้วเข้มข้นและทำให้แห้งโดยการไลโอไฟไรซ์เพื่อให้ได้ผงเปปไทด์ที่ละเอียด

ในการผลิตเปปไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนเฉพาะ เราใช้วิธี Fmoc-SPPS (การสังเคราะห์เปปไทด์บนเฟสของแข็ง) ในระหว่างกระบวนการสังเคราะห์บนเฟสของแข็ง จะมีกลุ่มที่สามารถทำปฏิกิริยาได้กับกลุ่มคาร์บอกซิลถูกนำมาใช้เพื่อทำปฏิกิริยากับกรดอะมิโนที่ได้รับการปกป้องแอมไวน์ ซึ่งจะยึดกรดอะมิโนตัวแรกไว้กับเรซิน จากนั้นปฏิกิริยาจะดำเนินไปจากปลาย C สู่ปลาย N เพื่อเสร็จสมบูรณ์การสังเคราะห์ลำดับเปปไทด์เป้าหมาย

วิธีการฟอก:

บริษัทของเราใช้ระบบโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพร้อมคอลัมน์แยกแบบ C18 กลับด้านสำหรับการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ โดยปฏิบัติตามขั้นตอนต่อไปนี้:

การระบุตัว: นำเปปไทด์ดิบจำนวนเล็กน้อยไปวิเคราะห์ด้วยมวลสเปกโตรมิเตอร์เพื่อยืนยันว่ามีเปปไทด์เป้าหมาย (ถ้าใช่ ให้ยืนยันเวลาการคงตัวในคอลัมน์ C18 ผ่านโครมาโทกราฟีเชิงวิเคราะห์; ถ้าไม่ ให้สังเคราะห์ใหม่เปปไทด์ดิบ)

การละลาย: ใช้ความช่วยเหลือจากคลื่นอัลตราโซนิกในการละลาย โดยปกติจะเลือกใช้น้ำ 90% + เอทานอล 10% (หรือเมทานอลหรือไอโซโพรพานอล) หากละลายได้ยาก ให้เติมกรดอะซีติกหรือกรดทริฟลูออโรอะซีติกตามสมควรเพื่อช่วยละลายหากลำดับมีกรดอะมิโนพื้นฐานในสัดส่วนสูง; เติมน้ำยาแอมโมเนียตามสมควรหากกรดอะมิโนเป็นกรดมากกว่า และใช้ DMSO (ไดเมทิลซัลโฟไซด์) หากกรดอะมิโนเป็นไฮโดรฟอบิก

การกรอง: กรองผลิตภัณฑ์ดิบที่ละลายแล้วผ่านแผ่นกรองขนาด 0.45 ไมครอน (เพื่อปกป้องคอลัมน์เตรียม) เพื่อใช้งานในภายหลัง

การบรรทุกตัวอย่าง: ใช้ระบบการเตรียมของเหลวประสิทธิภาพสูงเพื่อใส่ตัวอย่างของเหลวลงในคอลัมน์การเตรียม

การชะล้าง: ตามความชันของการชะล้างที่กำหนดไว้ในขั้นตอน 1) แยกสารปนเปื้อนออกจากเปปไทด์โดยใช้ความแตกต่างของโพลาฤทธิ์ของเปปไทด์ที่มีความยาวต่างกัน

ข้อดีของการใช้ระบบโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง:

มีความละเอียดสูงกว่าเทคนิคโครมาโทกราฟีชนิดอื่น ๆ; คอลัมน์การเตรียม C18 ที่ใช้มีประสิทธิภาพสูง อายุการใช้งานยาวนาน และสามารถทำซ้ำได้ดี มีความเร็วและประสิทธิภาพสูง โดยแต่ละตัวอย่างสามารถทำให้บริสุทธิ์ได้ภายในไม่กี่นาทีหรือหลายสิบนาที; เทคโนโลยีโครมาโทกราฟีแบบเฟสกลับมีการประยุกต์ใช้งานหลากหลายและเทคโนโลยีที่สุกกึ่ง พร้อมให้การเลือกที่ดีสำหรับสารประกอบอินทรีย์ประเภทต่าง ๆ

การทำให้เปปไทด์หยาบบริสุทธิ์และการระเหยแห้ง:

เปปไทด์ดิบจะถูกแยกและ提纯โดยใช้ระบบโครมาโทกราฟีของเหลวความเร็วสูงสำหรับการเตรียมตัวอย่าง และวิเคราะห์ความบริสุทธิ์โดยใช้โครมาโทกราฟีของเหลวความเร็วสูง (HPLC) เพื่อให้ได้สารของเหลวที่ผ่านเกณฑ์

ระบบระเหยหมุน: สารของเหลวที่ผ่านเกณฑ์จะถูกนำไปผ่านกระบวนการทำความร้อนในสุญญากาศเพื่อกำจัดตัวทำละลายอินทรีย์ที่ระเหยง่าย ในที่สุดจะได้สารละลายที่มีเปปไทด์เป้าหมาย จากนั้นจะถูกเก็บไว้ในตู้แช่แข็งเพื่อสร้างผลึกน้ำแข็งในรูปของแข็ง

ระบบ Freeze-Drying: เครื่องบรรจุที่ใส่ผลึกน้ำแข็งในรูปของแข็งจะถูกวางบนถาดของเครื่อง Freeze-dryer หรือพอร์ตสุญญากาศ ในสภาพสุญญากาศ ผลิตภัณฑ์เปปไทด์จะถูก sublime จนได้เปปไทด์ผงในรูปของแข็ง

ผลึกเปปไทด์พร้อมสำหรับการทำ Freeze-drying ในเครื่อง Freeze-dryer