การทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์ ประเทศไทย

เพื่อให้ได้เปปไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนจำเพาะ เราใช้วิธีการ Fmoc-SPPS (การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง)

พื้นหลัง:

เปปไทด์เป็นสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่เกี่ยวข้องกับการทำงานของเซลล์ต่างๆ ในสิ่งมีชีวิตทางชีววิทยา โครงสร้างโมเลกุลอยู่ระหว่างกรดอะมิโนและโปรตีน ซึ่งประกอบด้วยกรดอะมิโนหลายชนิดที่จัดเรียงตามลำดับเฉพาะและเชื่อมโยงกันด้วยพันธะเปปไทด์ (—NH—CO—) สารประกอบที่เกิดจากการควบแน่นของการขาดน้ำของโมเลกุลกรดอะมิโนสองตัวเรียกว่าไดเปปไทด์ ในทำนองเดียวกัน มีไตรเปปไทด์ เตตราเปปไทด์ เพนตะเปปไทด์ และอื่นๆ จนถึงโนนาเปปไทด์ สารประกอบที่มักสร้างจากโมเลกุลของกรดอะมิโน 10 ถึง 100 โมเลกุลผ่านการควบแน่นแบบขาดน้ำเรียกว่าโพลีเปปไทด์

บริการเปปไทด์แบบกำหนดเองหมายถึงการสังเคราะห์เปปไทด์ตามความต้องการของลูกค้า เช่น ลำดับ ความบริสุทธิ์ น้ำหนักโมเลกุล และปริมาณเกลือ เพื่อตอบสนองความต้องการเฉพาะ น้ำหนักโมเลกุลได้รับการยืนยันโดยแมสสเปกโตรมิเตอร์เพื่อให้แน่ใจว่า MS ดิบถูกต้อง ตามด้วยการทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ระบบโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง จากนั้นให้ความเข้มข้น และไลโอฟิไลเซชันเพื่อให้ได้ผงเปปไทด์ละเอียด

เพื่อให้ได้เปปไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนจำเพาะ เราใช้วิธีการ Fmoc-SPPS (การสังเคราะห์เปปไทด์เฟสของแข็ง) ในระหว่างการสังเคราะห์เฟสโซลิด หมู่ที่สามารถทำปฏิกิริยากับหมู่คาร์บอกซิลิกได้ถูกนำมาใช้บนตัวพาโซลิดเฟสเพื่อทำปฏิกิริยากับอะมิโนที่มีการป้องกันอะมิโน โดยยึดกรดอะมิโนตัวแรกไว้กับเรซิน จากนั้นปฏิกิริยาจะเสร็จสิ้นตั้งแต่ปลาย C ถึงปลาย N เพื่อให้การสังเคราะห์ลำดับเปปไทด์เป้าหมายเสร็จสมบูรณ์

วิธีการทำให้บริสุทธิ์:

บริษัทของเราใช้ระบบโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพร้อมคอลัมน์เตรียมการ Reverse C18 สำหรับการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ โดยทำตามขั้นตอนเหล่านี้:

บัตรประจำตัว:ใช้เปปไทด์ดิบจำนวนเล็กน้อยสำหรับแมสสเปกโตรเมทรีเพื่อยืนยันการมีอยู่ของเปปไทด์เป้าหมาย (หากใช่ ให้ยืนยันเวลาคงอยู่ในคอลัมน์ C18 ผ่านโครมาโตกราฟีเชิงวิเคราะห์ หากไม่มี ให้สังเคราะห์เปปไทด์ที่ดิบอีกครั้ง)

การละลาย:ใช้ความช่วยเหลืออัลตราโซนิกในการละลาย โดยทั่วไปจะเลือกน้ำ 90% + อะซิโตไนไตรล์ 10% (เมทานอลหรือไอโซโพรพานอล) สำหรับการละลายได้ยาก ให้เติมกรดอะซิติกหรือกรดไตรฟลูออโรอะซิติกที่เหมาะสมเพื่อช่วยละลายหากลำดับมีสัดส่วนกรดอะมิโนพื้นฐานที่สูงกว่า เติมน้ำแอมโมเนียที่เหมาะสมหากมีกรดอะมิโนที่เป็นกรดเป็นหลัก ใช้ DMSO (ไดเมทิลซัลฟอกไซด์) หากมีกรดอะมิโนที่ไม่ชอบน้ำเป็นส่วนประกอบหลัก

กรอง:กรองผลิตภัณฑ์น้ำมันดิบที่ละลายผ่านเมมเบรนกรอง 0.45 µm (เพื่อป้องกันคอลัมน์เตรียมการ) เพื่อใช้ในภายหลัง

กำลังโหลดตัวอย่าง:ใช้ระบบเตรียมของเหลวประสิทธิภาพสูงเพื่อป้อนตัวอย่างของเหลวลงในคอลัมน์เตรียมการ

ชะล้าง:ตามไล่ระดับการชะที่กำหนดในขั้นตอนที่ 1) ให้แยกสิ่งเจือปนออกจากเปปไทด์โดยใช้ความแตกต่างของขั้วของเปปไทด์ที่มีความยาวต่างกัน

ข้อดีของการใช้ระบบโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง:

มีความละเอียดสูงกว่าวิธีโครมาโทกราฟีแบบอื่น คอลัมน์เตรียมการ C18 ที่ใช้มีประสิทธิภาพคอลัมน์สูง อายุการใช้งานยาวนาน และทำซ้ำได้ดี ทำให้สามารถใช้ซ้ำได้ ความเร็วที่รวดเร็วและประสิทธิภาพสูง โดยแต่ละตัวอย่างจะถูกทำให้บริสุทธิ์ภายในไม่กี่นาทีหรือสิบนาที การใช้งานที่กว้างขวางและเทคโนโลยีที่สมบูรณ์ของโครมาโตกราฟีแบบรีเวิร์สเฟส นำเสนอการเลือกที่ดีสำหรับสารประกอบอินทรีย์ประเภทต่างๆ

การทำให้บริสุทธิ์เปปไทด์ดิบและการไลโอฟิไลเซชัน:

เปปไทด์ดิบถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ระบบเตรียมโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง และวิเคราะห์เพื่อความบริสุทธิ์โดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) เพื่อให้ได้ส่วนประกอบของเหลวที่ผ่านการรับรอง

ระบบการระเหยแบบหมุน: ส่วนประกอบของเหลวที่ผ่านการรับรองจะถูกให้ความร้อนด้วยสุญญากาศเพื่อกำจัดตัวทำละลายอินทรีย์ที่ระเหยง่าย และสุดท้ายจะได้สารละลายที่มีเปปไทด์เป้าหมาย ซึ่งจากนั้นนำไปแช่ในช่องแช่แข็งเพื่อสร้างผลึกน้ำแข็งแข็ง

ระบบทำแห้งเยือกแข็ง: ภาชนะที่บรรจุผลึกน้ำแข็งแข็งจะถูกวางบนถาดเครื่องทำแห้งแช่แข็งหรือช่องสูญญากาศ ในสภาพแวดล้อมสุญญากาศ ผลิตภัณฑ์เปปไทด์จะถูกระเหิด และได้ผงเปปไทด์ที่เป็นของแข็งในที่สุด

ผลึกเปปไทด์พร้อมสำหรับการทำแห้งแบบเยือกแข็งในเครื่องทำแห้งแบบแช่แข็ง