Paglilinis ng Peptide

Upang makakuha ng mga peptide na may mga tiyak na pagkakasunud-sunod ng amino acid, ginagamit namin ang Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis) na paraan.

Background:

Ang mga peptide ay mga bioactive substance na nauugnay sa iba't ibang cellular function sa mga biological na organismo. Ang kanilang molecular structure ay nasa pagitan ng mga amino acid at mga protina, na binubuo ng maramihang mga amino acid na nakaayos sa isang tiyak na pagkakasunud-sunod at iniugnay ng mga peptide bond (—NH—CO—). Ang mga compound na nabuo sa pamamagitan ng dehydration condensation ng dalawang amino acid molecules ay tinatawag na dipeptides, katulad din, mayroong mga tripeptides, tetrapeptides, pentapeptides, at iba pa, hanggang sa nonapeptides. Ang mga compound na karaniwang ginawa mula 10 hanggang 100 amino acid molecule sa pamamagitan ng dehydration condensation ay tinatawag na polypeptides.

Ang mga custom na serbisyo ng peptide ay tumutukoy sa synthesis ng mga peptide batay sa mga kinakailangan ng customer, tulad ng pagkakasunud-sunod, kadalisayan, timbang ng molekula, at nilalamang asin, upang matugunan ang mga partikular na pangangailangan. Ang molecular weight ay kinumpirma ng mass spectrometry upang matiyak ang kawastuhan ng krudo na MS, na sinusundan ng purification gamit ang isang high-performance na liquid chromatography system, pagkatapos ay konsentrasyon, at lyophilization upang makuha ang pinong peptide powder.

Upang makakuha ng mga peptide na may mga tiyak na pagkakasunud-sunod ng amino acid, ginagamit namin ang Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis) na paraan. Sa panahon ng solid-phase synthesis, isang pangkat na may kakayahang tumugon sa mga carboxylic na grupo ay ipinakilala sa solid-phase carrier upang tumugon sa amino-protected amino, na nakaangkla sa unang amino acid sa resin. Ang reaksyon ay pagkatapos ay nakumpleto mula sa C-end hanggang sa N-end upang makumpleto ang target na peptide sequence synthesis.

Mga Paraan ng Paglilinis:

Gumagamit ang aming kumpanya ng high-performance na liquid chromatography system na may reverse C18 preparatory column para sa separation at purification, kasunod ng mga hakbang na ito:

Pagkakakilanlan:Kumuha ng kaunting crude peptide para sa mass spectrometry upang kumpirmahin ang presensya ng target na peptide (kung oo, kumpirmahin ang oras ng pagpapanatili nito sa column ng C18 sa pamamagitan ng analytical chromatography; kung hindi, muling i-synthesize ang krudo peptide).

Dissolution:Gumamit ng ultrasonic assistance para sa dissolution, karaniwang pumipili ng 90% na tubig + 10% acetonitrile (methanol o isopropanol). Para sa mahirap na solubility, magdagdag ng naaangkop na acetic acid o trifluoroacetic acid upang tulungan ang paglusaw kung ang sequence ay may mas mataas na proporsyon ng mga pangunahing amino acid; magdagdag ng naaangkop na tubig ng ammonia kung nangingibabaw ang acidic amino acids. Gumamit ng DMSO (dimethyl sulfoxide) kung nangingibabaw ang hydrophobic amino acids.

Pagsala:I-filter ang natunaw na produkto ng krudo sa pamamagitan ng 0.45 µm filter membrane (upang protektahan ang preparatory column) para magamit sa ibang pagkakataon.

Sample Loading:Gamitin ang high-performance na liquid preparatory system para ipasok ang liquid sample sa preparatory column.

Elution:Batay sa elution gradient na tinutukoy sa hakbang 1), paghiwalayin ang mga impurities mula sa mga peptide gamit ang mga pagkakaiba ng polarity ng iba't ibang haba ng peptides.

Mga kalamangan ng paggamit ng isang high-performance na liquid chromatography system:

Mas mataas na resolution kaysa sa iba pang paraan ng chromatography; ang C18 preparatory column na ginamit ay may mataas na kahusayan ng column, mahabang buhay ng serbisyo, at magandang reproducibility, na nagbibigay-daan para sa paulit-ulit na paggamit; mabilis na bilis at mataas na kahusayan, na ang bawat sample ay dinadalisay sa loob ng ilang minuto o sampu-sampung minuto; malawak na aplikasyon at mature na teknolohiya ng reverse-phase chromatography, na nag-aalok ng mahusay na selectivity para sa iba't ibang uri ng mga organic compound.

Crude Peptide Purification at Lyophilization:

Ang krudo na peptide ay pinaghihiwalay at nililinis gamit ang isang high-performance na liquid chromatography na sistema ng paghahanda at sinusuri para sa kadalisayan gamit ang isang high-performance na liquid chromatograph (HPLC) upang makuha ang mga kwalipikadong bahagi ng likido.

Rotary Evaporation System: Ang qualified liquid component ay sumasailalim sa vacuum heating upang maalis ang madaling pabagu-bago ng mga organikong solvent, sa wakas ay nakakakuha ng solusyon na naglalaman ng target na peptide, na pagkatapos ay inilagay sa isang freezer upang bumuo ng solid ice crystals.

Freeze-Drying System: Ang mga container na may hawak na solid ice crystal ay inilalagay sa freeze-dryer tray o vacuum port. Sa isang vacuum na kapaligiran, ang produktong peptide ay na-sublimate, sa huli ay nagbubunga ng solid peptide powder.

Ang mga peptide crystal ay handa na para sa freeze-dryer sa freeze-dryer.