Peptit Saflaştırma Türkiye

Spesifik amino asit sekanslarına sahip peptitler elde etmek için Fmoc-SPPS (katı fazlı peptit sentezi) yöntemini kullanıyoruz.

Arka plan:

Peptitler biyolojik organizmalardaki çeşitli hücresel işlevlerle ilgili biyoaktif maddelerdir. Moleküler yapıları, belirli bir sıraya göre düzenlenmiş ve peptid bağlarıyla (—NH—CO—) birbirine bağlanmış birden fazla amino asitten oluşan amino asitler ve proteinler arasında yer alır. İki amino asit molekülünün dehidrasyon yoğunlaşması ile oluşan bileşiklere dipeptitler denir, benzer şekilde tripeptitler, tetrapeptitler, pentapeptitler ve benzeri, apeptit olmayanlara kadar vardır. Tipik olarak 10 ila 100 amino asit molekülünden dehidrasyon yoğunlaşması yoluyla yapılan bileşiklere polipeptitler denir.

Peptit özel hizmetleri, belirli ihtiyaçları karşılamak için sekans, saflık, moleküler ağırlık ve tuz içeriği gibi müşteri gereksinimlerine dayalı olarak peptitlerin sentezini ifade eder. Molekül ağırlığı, ham MS'nin doğruluğunu sağlamak için kütle spektrometrisi ile doğrulanır, ardından yüksek performanslı bir sıvı kromatografi sistemi kullanılarak saflaştırma yapılır, ardından ince peptid tozu elde etmek için konsantrasyon ve liyofilizasyon yapılır.

Spesifik amino asit sekanslarına sahip peptitler elde etmek için Fmoc-SPPS (katı fazlı peptit sentezi) yöntemini kullanıyoruz. Katı faz sentezi sırasında, karboksilik gruplarla reaksiyona girebilen bir grup, amino korumalı amino ile reaksiyona girmek üzere katı faz taşıyıcı üzerine eklenir ve ilk amino asidi reçineye sabitler. Reaksiyon daha sonra hedef peptit dizisi sentezini tamamlamak için C ucundan N ucuna kadar tamamlanır.

Saflaştırma Yöntemleri:

Şirketimiz, aşağıdaki adımları izleyerek ayırma ve saflaştırma için ters C18 hazırlık kolonuna sahip yüksek performanslı bir sıvı kromatografi sistemi kullanmaktadır:

Kimlik:Hedef peptidin varlığını doğrulamak için kütle spektrometrisi için az miktarda ham peptid alın (evet ise analitik kromatografi yoluyla C18 sütununda tutulma süresini doğrulayın; hayır ise ham peptidi yeniden sentezleyin).

Çözünme:Çözünme için genellikle %90 su + %10 asetonitril (metanol veya izopropanol) seçerek ultrasonik yardım kullanın. Çözünürlüğün zor olduğu durumlarda, dizi daha yüksek oranda bazik amino asitlere sahipse çözünmeye yardımcı olmak amacıyla uygun asetik asit veya trifloroasetik asit ekleyin; Asidik amino asitler baskınsa uygun amonyak suyu ekleyin. Hidrofobik amino asitler baskınsa DMSO (dimetil sülfoksit) kullanın.

filtrasyon:Çözünmüş ham ürünü daha sonra kullanmak üzere 0.45 μm filtre membranından (hazırlık sütununu korumak için) filtreleyin.

Örnek Yükleme:Sıvı numuneyi hazırlık kolonuna girmek için yüksek performanslı sıvı hazırlama sistemini kullanın.

Elüsyon:Adım 1)'de belirlenen elüsyon gradyanına dayanarak, değişen uzunluktaki peptitlerin polarite farklılıklarını kullanarak safsızlıkları peptitlerden ayırın.

Yüksek performanslı sıvı kromatografi sistemi kullanmanın avantajları:

Diğer kromatografi yöntemlerine göre daha yüksek çözünürlük; Kullanılan C18 hazırlık kolonu yüksek kolon verimliliğine, uzun hizmet ömrüne ve iyi tekrarlanabilirliğe sahiptir ve tekrar tekrar kullanıma olanak sağlar; her numunenin dakikalar veya onlarca dakika içinde saflaştırılmasıyla hızlı hız ve yüksek verimlilik; Ters faz kromatografisinin geniş uygulaması ve olgun teknolojisi, çeşitli organik bileşik türleri için iyi seçicilik sunar.

Ham Peptit Saflaştırma ve Liyofilizasyon:

Ham peptid, yüksek performanslı bir sıvı kromatografi hazırlama sistemi kullanılarak ayrılır ve saflaştırılır ve nitelikli sıvı bileşenleri elde etmek için yüksek performanslı bir sıvı kromatografı (HPLC) kullanılarak saflık açısından analiz edilir.

Döner Buharlaştırma Sistemi: Nitelikli sıvı bileşen, kolayca uçucu organik çözücüleri uzaklaştırmak için vakumla ısıtmaya tabi tutulur, sonunda hedef peptidi içeren bir çözelti elde edilir ve daha sonra bu, katı buz kristalleri oluşturmak üzere bir dondurucuya yerleştirilir.

Dondurarak Kurutma Sistemi: Katı buz kristallerini tutan kaplar, dondurarak kurutma tepsisine veya vakum portuna yerleştirilir. Bir vakum ortamında, peptit ürünü süblimleştirilir ve sonuçta katı peptit tozu elde edilir.

Peptit kristalleri dondurarak kurutucuda dondurarak kurutmaya hazırdır.