Очищення пептидів Україна

Для отримання пептидів зі специфічними амінокислотними послідовностями ми використовуємо метод Fmoc-SPPS (твердофазний пептидний синтез).

Довідкова інформація:

Пептиди - це біологічно активні речовини, пов'язані з різними функціями клітин біологічних організмів. Їхня молекулярна структура знаходиться між амінокислотами та білками, складається з кількох амінокислот, розташованих у певному порядку та з’єднаних пептидними зв’язками (—NH—CO—). Сполуки, утворені дегідратаційною конденсацією двох молекул амінокислот, називають дипептидами, так само існують трипептиди, тетрапептиди, пентапептиди і так далі, аж до нонапептидів. Сполуки, які зазвичай складаються з 10-100 молекул амінокислот шляхом дегідратації, називаються поліпептидами.

Спеціальні послуги щодо пептидів стосуються синтезу пептидів на основі вимог замовника, таких як послідовність, чистота, молекулярна маса та вміст солі, для задоволення конкретних потреб. Молекулярна маса підтверджується мас-спектрометрією, щоб переконатися в правильності неочищеного МС, з подальшим очищенням за допомогою системи високоефективної рідинної хроматографії, потім концентрацією та ліофілізацією для отримання тонкого пептидного порошку.

Для отримання пептидів зі специфічними амінокислотними послідовностями ми використовуємо метод Fmoc-SPPS (твердофазний пептидний синтез). Під час твердофазного синтезу група, здатна реагувати з карбоксильними групами, вводиться на твердофазний носій для реакції з аміно-захищеною аміногрупою, прикріплюючи першу амінокислоту до смоли. Потім реакція завершується від С-кінця до N-кінця для завершення синтезу послідовності цільового пептиду.

Методи очищення:

Наша компанія використовує систему високоефективної рідинної хроматографії зі зворотною підготовчою колонкою C18 для розділення та очищення, дотримуючись таких кроків:

Ідентифікація:Візьміть невелику кількість неочищеного пептиду для мас-спектрометрії, щоб підтвердити наявність цільового пептиду (якщо так, підтвердіть час його утримування в колонці C18 за допомогою аналітичної хроматографії; якщо ні, повторно синтезуйте неочищений пептид).

Розчинення:Використовуйте ультразвукову допомогу для розчинення, зазвичай вибираючи 90% води + 10% ацетонітрилу (метанолу або ізопропанолу). Для важкої розчинності додайте відповідну оцтову кислоту або трифтороцтову кислоту, щоб сприяти розчиненню, якщо послідовність містить більшу частку основних амінокислот; додайте відповідну аміачну воду, якщо переважають кислі амінокислоти. Використовуйте ДМСО (диметилсульфоксид), якщо переважають гідрофобні амінокислоти.

фільтрація:Відфільтруйте розчинений неочищений продукт через фільтруючу мембрану 0.45 мкм (для захисту підготовчої колонки) для подальшого використання.

Завантаження зразка:Використовуйте високоефективну систему підготовки рідини для введення рідкого зразка в підготовчу колонку.

елюція:На основі градієнта елюції, визначеного на кроці 1), відокремте домішки від пептидів, використовуючи різницю полярностей пептидів різної довжини.

Переваги використання системи високоефективної рідинної хроматографії:

Вища роздільна здатність, ніж інші методи хроматографії; використовувана підготовча колонка С18 має високу ефективність колонки, тривалий термін служби та хорошу відтворюваність, що дозволяє багаторазове використання; швидка швидкість і висока ефективність, коли кожна проба очищається протягом хвилин або десятків хвилин; широке застосування та зріла технологія хроматографії з оберненою фазою, що забезпечує хорошу селективність для різних типів органічних сполук.

Очищення неочищеного пептиду та ліофілізація:

Неочищений пептид відокремлюють і очищають за допомогою препаративної системи високоефективної рідинної хроматографії та аналізують на чистоту за допомогою високоефективного рідинного хроматографа (HPLC) для отримання кваліфікованих рідких компонентів.

Ротаційна система випаровування: кваліфікований рідкий компонент піддають вакуумному нагріванню для видалення легколетких органічних розчинників, нарешті отримуючи розчин, що містить цільовий пептид, який потім поміщають у морозильну камеру для утворення твердих кристалів льоду.

Система сублімаційної сушіння: Контейнери з твердими кристалами льоду розміщують на лотку сублімаційної сушарки або вакуумному отворі. У вакуумному середовищі пептидний продукт сублімується, зрештою одержуючи твердий порошок пептиду.

Кристали пептиду готові до сублімаційної сушки в сублімаційній сушарці.