Íonú Peptide

Chun peptides a fháil le seichimh aimínaigéad ar leith, úsáidimid an modh Fmoc-SPPS (sintéis peptide soladach-chéim).

Cúlra:

Is substaintí bithghníomhacha iad peptides a bhaineann le feidhmeanna ceallacha éagsúla in orgánaigh bhitheolaíocha. Tá a struchtúr móilíneach idir aimínaigéid agus próitéiní, comhdhéanta d'il-aimínaigéid eagraithe in ord sonrach agus nasctha le bannaí peiptíde (—NH-CO-). Tugtar dipeptides ar chomhdhúile atá déanta ag comhdhlúthú díhiodráitithe dhá mhóilín aimínaigéad, mar an gcéanna, tá tripeptides, tetrapeptides, pentapeptides, agus mar sin de, suas le nonapeptides. Tugtar polaipeiptídí ar chomhdhúile a dhéantar de ghnáth ó 10 go 100 móilín aimínaigéad trí chomhdhlúthú díhiodráitithe.

Tagraíonn seirbhísí saincheaptha peptide do shintéis na peptides bunaithe ar riachtanais an chustaiméara, mar shampla seicheamh, íonacht, meáchan móilíneach, agus ábhar salainn, chun freastal ar riachtanais shonracha. Deimhnítear an meáchan móilíneach le mais-speictriméadracht chun cruinneas an amh MS a chinntiú, agus ina dhiaidh sin íonú ag baint úsáide as córas crómatagrafaíocht leachtach ardfheidhmíochta, ansin tiúchan, agus lyophilization chun an púdar peptide fíneáil a fháil.

Chun peptides a fháil le seichimh aimínaigéad ar leith, úsáidimid an modh Fmoc-SPPS (sintéis peptide soladach-chéim). Le linn sintéise soladach-chéim, tugtar isteach grúpa atá in ann imoibriú le grúpaí carbocsaileacha ar an iompróir soladach-chéim chun imoibriú leis an aimín cosanta aimín, ag ancaire an chéad aimínaigéad don roisín. Críochnaítear an t-imoibriú ansin ón deireadh C go dtí an N-deireadh chun sintéis an t-ord peptíde sprice a chríochnú.

Modhanna Íonúcháin:

Úsáideann ár gcuideachta córas crómatagrafaíocht leachtach ardfheidhmíochta le colún ullmhúcháin C18 droim ar ais le haghaidh scaradh agus íonú, ag leanúint na gcéimeanna seo:

Aithint:Glac méid beag amh-pheptíde le haghaidh mais-speictriméadrachta chun láithreacht an sprice peptíde a dhearbhú (má tá, deimhnigh a chuid ama coinneála sa cholún C18 trí chrómatagrafaíocht anailíseach; mura bhfuil, déan an peiptíd amh a athshintéisiú).

Díscaoileadh:Bain úsáid as cúnamh ultrasonaic le haghaidh díscaoileadh, ag roghnú 90% uisce + 10% acetonitrile (meatánól nó isopropanol) de ghnáth. Le haghaidh tuaslagthacht deacair, cuir aigéad aicéiteach cuí nó aigéad trifluoroacetic chun cabhrú le díscaoileadh má tá cion níos airde de aimínaigéid bhunúsacha sa seicheamh; cuir uisce amóinia cuí leis más aimínaigéid aigéadacha is mó. Úsáid DMSO (sulfocsaíd démheitile) más aimínaigéid hidreafóbach is mó atá i gceist.

Scagadh:Déan an táirge créite tuaslagtha a scagadh trí membrane scagaire 0.45 µm (chun an colún ullmhúcháin a chosaint) le húsáid níos déanaí.

Luchtú Samplach:Bain úsáid as an gcóras ullmhúcháin leachtach ardfheidhmíochta chun an sampla leachtach a ionchur sa cholún ullmhúcháin.

Elution:Bunaithe ar an grádán elution arna chinneadh i gcéim 1), deighil na neamhíonachtaí ó na peptídí ag baint úsáide as na difríochtaí polaraíocht na peptides faid éagsúla.

Buntáistí a bhaineann le córas crómatagrafaíocht leachta ardfheidhmíochta a úsáid:

Taifeach níos airde ná modhanna crómatagrafaíochta eile; tá éifeachtacht ard colún, saol seirbhíse fada, agus in-atáirgtheacht mhaith ag an gcolún ullmhúcháin C18 a úsáidtear, rud a ligeann d'úsáid arís agus arís eile; luas tapa agus ardéifeachtúlacht, agus gach sampla á íonú laistigh de nóiméad nó deich nóiméad; cur i bhfeidhm leathan agus teicneolaíocht aibí crómatagrafaíocht droim ar ais, ag tairiscint dea-roghnaíochta do chineálacha éagsúla comhdhúile orgánacha.

Íonú Peiptíde Amh agus Lyophilization:

Déantar an peptide amh a scartha agus a íonú ag baint úsáide as córas ullmhúcháin crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta agus déantar anailís air le haghaidh íonachta ag baint úsáide as crómatagraf leachtach ardfheidhmíochta (HPLC) chun na comhpháirteanna leachtacha cáilithe a fháil.

Córas Galú Rothlach: Déantar an comhpháirt leachtach cáilithe a théamh i bhfolús chun tuaslagóirí orgánacha so-ghalaithe a bhaint go héasca, ag fáil réiteach ina bhfuil an spriocpheptíde ar deireadh, a chuirtear i reoiteoir ansin chun criostail oighir soladach a fhoirmiú.

Córas Reo-Thriomaithe: Cuirtear coimeádáin ina bhfuil na criostail soladach oighir ar an tráidire reoite-triomadóir nó ar an gcalafort folúis. I dtimpeallacht bhfolús, tá an táirge peptide sublimated, ar deireadh thiar ag tabhairt púdar soladach peptide.

Tá na criostail peptide réidh le haghaidh reo-thriomú sa triomadóir reoite.