Glacadh Peptide

Chun péiptídi a fháil le seanchainte faoi chothrom rudaí amioideacha, úsann muid an modh Fmoc-SPPS (saincheartú péiptíde sólid-fhásach).

Cúlra:

Is píobair bheo iad na péiptidí a chaitheann le gach cineál fionnchumais lámh in eilíochtaí beo. Tá a n-iompar moleacúl idir aigéidín agus prótaein, cosúil le cúigéal amháin nó níos mó de na haigéidín ar líne speisialta acu agus ceangailte leis an chéad i gcás éagsúla (—NH—CO—). Chuirtear cóipéis atá cruthaithe as dhlúthú dá dhá mhóléad aigéidín ina chomhpháirt mar dhi-péiptidí, mar sin tá trí-péiptidí, té-péiptidí, cé-péiptidí, agus mar sin de go dtí no-péiptidí. Is pola-péiptidí iad na comhdhéan is gnáth cruthaithe ó 10 go 100 móléad aigéidín trídhlúthú.

Tá na seirbhísí péiptidí tuaraithe ag brath ar chur i gcás péiptidí in éice le riachtanais custaiméir, mar shampla an séimhriú, an ghlacadh, an chéadchuid moladail agus an n-ádh sáile, chun riachtanais speisialta a bhrú. Deimhnítear an cheadchuid moladail trí speictroméadach maithlín chun cinntiú ar fheabhsan an MS crú, ansin deimhnítear é trí shistém chromadactálachas ardghnómaigh, ansin comhdhéanamh, agus lyophilization chun an phásta péiptidí fíne a fháil.

Chun phéiptidí le séimhriú go háirithe d'aonnama a fháil, úsáidimid an modh Fmoc-SPPS (solid-phase peptide synthesis). Le linn an síntise sólid-faiche, cuireadh grúpa in ann freastal le glúineacha carboxaidh ar an gcarbhar sólid-faiche chun freastal ar an ngéag-amhainníocht amhainní, a n-anchraíonn an chéad n-aonnama ar an rísin. D'fheabhsaítear an réacsa ón gcéad C go dtí an chéad N chun an séimhriú phéiptidí ceannaire a chríochnú.

Modhanna Glacadh:

Úsáidimid chóras crómataíochta leictreasc ina bhfuil colún fágairt C18 chun foirgneamh agus glanadh a dhéanamh, mar thoradh ar na cóipseál seo:

Áirithe: Tóg faoi mhéid de phéipteas crúdeach chun feiceáil an bhfuil an péipteas ceannaire ann (má tá, comhligh an am fuastacht éagsúla sa colún C18 trí chrómataíocht eolais; má níl, déan athghlanú ar an bpéipteas crúdeach).

Díoltadh: Úsáid cabhrach uilliméadach chun díoltadh a dhéanamh, gineally ag roghnú 90% uisce + 10% acetónitrile (nó meotán nó isopropanol). Chun cúiseanna difriúla a díoltadh, cuir béic shuíocháin nó trifluorobéic shuíocháin i gcás go bhfuil ceadrám uasal n-aminioacaidí san ordugh; cuir béic nhídhéagairiúcháin amháin má tá n-aminioacaidí éadrom i gcás; úsáid DMSO (dimethyl sulfoxide) má tá n-aminioacaidí hidrofóbacha i gcás.

Scartadh: Scart an phróduct crúdach atá díoltaithe tríd mheambrán scart 0.45 µm (chun cosaint ar an gcolún fágairt) don úsáid i ndiaidh sin.

Lódáil Samplu: Úsáid an chóras leictreach fíor-éifeachtach chun an t-úsraí leictreach a chur isteach i gcolún fíoraithe.

Eilíochta: Bunú ar an gcladhdh eilíochta a shonraíodh i rith 1), deighilfí na n-imearca ó na péptaidí ag baint úsáid as na difríochtaí polair idir péptaidí fada agus gairid.

Buntáistí úsáide córais crómatais leictreach fíor-éifeachtach:

Réashonlacht níos airde ná nóinéalaí crómatais eile; tá colún fíoraithe C18 in úsáid againn a bhfuil éifeacht colún uasal aige, beart saois fhada, agus athbheochan maith, ligean dár n-úsáid arís is arís; luas agus éifeachtacht ard, agus glacadh léi go gcumasaíonn gach sampla faoi dhearbhadh faoi mhín nó míneacha; scileanna láidre agus teicniúc féinmholta ag crómatas rí-threo, a thugann rogha maith do dháimh éagsúla d'fhocail breise.

Foghlaím agus Feamainn Crúibe Péptaidí:

Deiridh agus glanann an peaptaid ghruamach ag baint úsáide as chóras foinse leictreacha de pherfórmás ard agus anailíonn sé chun tuiscint faoi chúram chun comhracacha uisce a fháil ar fheabhsú.

Córas Athbheithiú Rothla: Glacann an chomhrac uisce ceart lenár n-athbheithiú faoi bhunús vacuüm chun soiléir orgánach éadrom a bhaint, agus ansin faightear réitigh a chontainn an peaptaid taobh isteach san iasacht, atá ansin ar fheabhsú i gciste congheall chun crithbhuic sólra a chruthú.

Córas Congheall Athbheithiú: Cuireadh na hionadaithe a chontainn na crithbhuic sólra ar pháipéar na hoifige congeall athbheithiú nó ar pháirt chaomhnú vacuüm. Faoidh imithe sa mbealach vacuüm, cuiretar an toradh peaptaid ina chumhdach tríd an gcruthú, agus déantar an cumhdach peaptaid sólra mar thoradh dheireanach.

Tá na cristéil peaptaid réadha do chongheall athbheithiú sa chongheall athbheithiú.